在表觀遺傳學研究和藥物發現領域,甲基轉移酶作為重要的治療靶點,其活性測定方法的開發往往面臨巨大挑戰。不同甲基轉移酶對底物和輔因子的偏好各異,傳統方法需要為每個靶點單獨開發檢測體系,耗時耗力且難以標準化。Transcreener® EPIGEN甲基轉移酶活性測定試劑盒提供了一套基于SAH通用檢測的均相,即混即°解決方案,c底改變了這一局面。
一、核心原理:SAH轉AMP,實現通用檢測
本試劑盒的檢測原理基于所有甲基轉移酶反應的共性——催化甲基從輔因子S-腺苷甲硫氨酸轉移至底物,同時產生S-腺苷同型半胱氨酸。通過偶聯酶系統將SAH轉化為AMP,再利用Transcreener® AMP2/GMP2檢測平臺進行定量,即可精確反映甲基轉移酶活性。
技術流程三步完成:
1. 甲基轉移酶反應:酶催化甲基轉移,產生SAH。
2. 偶聯酶轉化:將SAH定量轉化為AMP。
3. 熒光檢測:AMP與示蹤劑競爭結合抗體,產生可量化的熒光信號(FP或TR-FRET格式)。
二、關鍵優勢:專為HTS優化
1. 通用性檢測,覆蓋所有甲基轉移酶
一種檢測體系適用于任何甲基轉移酶,無論底物是組蛋白、DNA還是小分子,無需為每個靶點單獨開發方法,顯著縮短了方法開發周期。
2. 寬泛的SAM濃度范圍
兼容0.1 µM至50 µM的SAM濃度區間,支持生理相關條件下的酶活性測定,避免了高濃度SAM可能帶來的底物抑制或偏離生理狀態的問題。
3. z越的數據質量
在低底物轉化率下仍可獲得Z' ≥ 0.7的優異數據質量和≥100 mP的偏振位移,滿足高通量篩選的統計學要求。低轉化率檢測同時減少了酶用量,節省了昂貴的重組蛋白成本。
4. 遠紅外示蹤劑,降低干擾
采用遠紅外熒光示蹤劑,有效避開了化合物自發熒光和光散射的干擾,篩選中假陽性率顯著降低。
5. 信號穩定性>24小時
試劑和信號穩定性超過24小時,支持自動化工作流程中任意規模的批次處理,無需嚴格的時間控制。
三、驗證與應用
本試劑盒已使用Reaction Biology公司提供的多種純化甲基轉移酶完成驗證,涵蓋組蛋白甲基轉移酶和DNA甲基轉移酶等主要類別,性能可靠。
四、總結
Transcreener® EPIGEN 甲基轉移酶活性測定試劑盒憑借通用性覆蓋所有甲基轉移酶、寬范圍SAM濃度兼容、Z' ≥ 0.7的優異數據質量、遠紅外讀數降低化合物干擾、即混即讀HTS兼容五大核心優勢,為表觀遺傳學靶點的藥物發現提供了高效、標準化的解決方案,是甲基轉移酶抑制劑篩選和研究的理想工具。
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