一、產品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的兔抗人磷酸化RPA32（S33）多克隆抗體（貨號：A300-246A），特異性識別RPA復合物中32 kDa亞基（RPA2）在絲氨酸33位點的單磷酸化修飾。RPA32的S33磷酸化是細胞周期依賴性調控事件，與S期進程及DNA損傷應答密切相關。該抗體經嚴格驗證適用于蛋白免疫印跡檢測，是研究RPA磷酸化動態調控和DNA代謝調控機制的特異性工具。

二、產品推哥與質量參數

項目 | 規格

靶標 | RPA32 磷酸化（Ser33）

驗證種屬 | 人類

宿主/克隆性 | 兔多克隆（Whole IgG）

免疫原 | 人RPA2蛋白（NP_002937）第33位磷酸化絲氨酸周圍序列對應的單磷酸化合成肽

純化方式 | 抗原親和純化（固定化多肽柱）

濃度 | 1000 µg/mL（A280法測定，1 mg/mL IgG吸光系數1.4）

緩沖體系 | Tris-檸檬酸-磷酸鹽緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊d化鈉（防腐劑）

儲存條件 | 2~8°C（請勿冷凍）

有效期 | 自收貨之日起1年

三、應用與推薦稀釋比例

應用體系 | 推薦稀釋比例 | 關鍵操作備注

蛋白免疫印跡（WB） | 1:10,000 ~ 1:25,000 | 封閉液/抗體稀釋液：5% Milk-TBST；一抗孵育過夜（4°C）

WB（細胞裂解液直接檢測） | 按WB范圍 | 二抗推薦抗兔IgG重+輕鏈抗體（如A120-101P）

*注：本品目前僅驗證適用于WB應用，其他應用體系需用戶自行優化驗證

四、靶點生物學背景

RPA（復制蛋白A）是一個異源三聚體復合物（RPA70/RPA32/RPA14），在DNA代謝中發揮多重核心功能：

DNA錯配修復（MMR）：與MSH2、MLH1、PCNA及DNA聚合酶δ協同完成修復。

DNA損傷應答：RPA32亞基在S期進入及DNA損傷發生后，被ATM、ATR、DNA-PK等激酶磷酸化，S33位點是cdc2家族激酶在細胞周期調控中修飾的關鍵位點之一。

磷酸化功能的位點差異性：相較于S4/S8雙磷酸化（主要響應DNA損傷），S33磷酸化更側重于細胞周期依賴性調控，其動態變化反映復制脅迫及檢查點激活狀態。

五、別名

REPA2；replication factor A protein 2；replication protein A 32 kDa subunit；replication protein A 34 kDa subunit；RF-A protein 2；RP-A p32；RP-A p34；RPA32

六、使用與儲存注意事項

避免反復凍融：本品為液體形式，請于2~8°C持續保存，切勿冷凍

防腐劑提示：緩沖液含0.09%疊d化鈉，進行活細胞實驗或體內應用前請透析去除

S33磷酸化檢測要點：

-S33磷酸化水平在細胞周期中呈動態變化，建議使用同步化細胞（如血清饑餓釋放或雙胸腺嘧啶阻斷）進行實踐梯度實驗以觀測調控趨勢。

-推薦使用磷酸酶抑制劑（如Na?VO?、β-甘油磷酸鹽）裂解液制備樣本，以維持磷酸化狀態

陽性對照推薦：血清刺激后釋放進入S期的同步化HeLa細胞裂解液，或經ATR激活劑（如羥基脲）處理的細胞樣本

與S4/S8抗體的區別：本品特異識別S33單磷酸化位點，與識別S4/S8雙磷酸化的抗體在檢測譜上互補，建議根據實驗目的（細胞周期調控 vs. 損傷應答）選用相應工具。

*本手冊信息基于出廠批次驗證數據，具體實驗條件可能因樣本類型及實驗室環境而異，建議用戶根據實際體系進行預實驗優化。