一、產(chǎn)品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的親和純化的兔抗人TFEB（轉(zhuǎn)錄因子EB）多克隆抗體（貨號：A303-673A），特異性識別人TFEB蛋白C端區(qū)域（第426~476位氨基酸）。TFEB是MiT/TFE 家族轉(zhuǎn)錄因子的核心成員，作為溶酶體生物發(fā)生和自噬通路的主調(diào)控因子，同時在免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要功能。該抗體經(jīng)嚴格驗證適用于免疫沉淀及蛋白質(zhì)印跡檢測，是研究溶酶體穩(wěn)態(tài)，自噬調(diào)控及免疫信號通路的可靠工具。

二、產(chǎn)品規(guī)格與質(zhì)量參數(shù)

項目 | 規(guī)格

靶標| TFEB（轉(zhuǎn)錄因子EB）

驗證種屬|(zhì) 小鼠、人類

宿主/克隆性| 兔多克隆（Whole IgG）

免疫原| 人TFEB蛋白（NP_009093.1）C端第426~476位氨基酸區(qū)域?qū)?yīng)的重組表位肽段

純化方式| 抗原親和純化（固定化表位特異性支持物）

濃度| 1000 µg/mL（A280法測定，1 mg/mL IgG吸光系數(shù)1.4）

緩沖體系| Tris-檸檬酸-磷酸鹽緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊d化鈉（防腐劑）

儲存條件| 2~8°C（請勿冷凍）

有效期| 自收貨之日起1年

三、應(yīng)用與推薦稀釋比例

應(yīng)用體系 | 推薦稀釋/使用濃度 | 關(guān)鍵操作備注

蛋白免疫印跡（WB）| 1:2,000 ~ 1:25,000 | 封閉液/抗體稀釋液：5% Milk-TBST；一抗孵育過夜（4°C）

WB（細胞裂解液直接檢測）| 按WB范圍 | 二抗推薦抗兔IgG重+輕鏈抗體（如A120-101P）

WB（IP后檢測）| 按WB范圍 | 二抗推薦抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)物，封閉液中加5%正常豬血清以減少重鏈干擾

免疫沉淀（IP）| 6 µg/mg 總蛋白裂解液 | 每mg裂解物使用6 µg抗體

四、靶點生物學背景

TFEB（轉(zhuǎn)錄因子EB）屬于MiT/TFE家族（成員包括TFEB、TFE3、MITF等），通過識別并結(jié)合DNA上的特定調(diào)控序列，調(diào)控多種細胞過程

溶酶體生物發(fā)生于自噬調(diào)控：TFEB事溶酶體基因表達的種屬調(diào)控因子。其通過識別CLEAR-box序列（5'-GTCACGTGAC-3'），激活溶酶體相關(guān)基因（包括溶酶體水解酶、膜蛋白及自噬相關(guān)基因）的表達，在細胞營養(yǎng)感應(yīng)和清除受損細胞器過程中發(fā)揮核心作用。

免疫調(diào)控功能：在活化的CD4+ T細胞中，TFEB與TFE3協(xié)同激活CD40L的表達，參與T細胞依賴性抗體應(yīng)答和胸腺依賴性體液免疫

DNA結(jié)合與二聚化：TFEB以同源二聚體或與TFE3、MITF形成異源二聚體的方式，結(jié)合E-box序列（3'-CANNTG-5'）及免疫球蛋白增強子中的gamma-E3 box亞型，實現(xiàn)轉(zhuǎn)錄調(diào)控的多樣性。

五、別名

ALPHATFEB；BHLHE35；class E basic helix-loop-helix protein 35；T-cell transcription factor EB；TCFEB；transcription factor EB

六、使用與儲存注意事項

避免反復(fù)凍融：本品為液體形式，請于2-8℃持續(xù)保存，切勿冷凍

防腐劑提示：緩沖液含0.09%疊d化鈉，進行活細胞實驗或體內(nèi)應(yīng)用前請透析去除。

分子量與條帶觀察：TFEB分子量約為55 kDa，但受磷酸化修飾影響，WB中可能觀察到遷移率改變（多條帶貨條帶上移），屬正常現(xiàn)象

亞細胞定位提示：TFEB在營養(yǎng)充足條件下主要定位與細胞質(zhì)，在溶酶體應(yīng)激或營養(yǎng)缺乏時發(fā)生取磷酸化并轉(zhuǎn)位至細胞核。建議實驗前根據(jù)研究目的進行相應(yīng)處理（如饑餓誘導(dǎo)）。

陽性對照推薦：經(jīng)溶酶體抑制劑（如氯喹、巴弗洛霉素A1）或氨基酸饑餓處理的HeLa或MEF細胞裂解液可作為WB陽性對照

*本手冊信息基于出廠批次驗證數(shù)據(jù)，具體實驗條件可能因樣本類型及實驗室環(huán)境而異，建議用戶根據(jù)實際體系進行預(yù)實驗優(yōu)化。