白蛋白(Albumin)是血清中行亮極為豐富的蛋白質,約占血漿總蛋白的60%。它在維持血液膠體滲透壓,PH平衡以及運輸支付算,氨基酸,激素等多種生物活性分子中發揮著不可替代的生理功能。小鼠作為常用的模式生物之一,其白蛋白水平的準確檢測在代謝研究,肝腎疾病模型評估,營養狀態監測及藥物蛋白清除率分析中具有廣泛需求。本文介紹由艾美捷代理Bethyl推出的親和純化的山羊抗小鼠白蛋白多克隆抗體(貨號:A90-134A),并圍繞其特異性、應用平臺及實驗要點進行技術解析。
1. 產品設計與核心特異性
該抗體為山羊源多克隆IgG,采用抗原親和色譜法純化(小鼠白蛋白偶聯瓊脂糖珠),去報高純度的特異性抗體回收。經免疫電泳和ELISA雙重驗證,該抗體與小鼠白蛋白具有特異性反應。由于白蛋白在不同物種間具有較高的序列同源性,該抗體可能與其他物種(如人、大鼠、兔等)的白蛋白發生交叉反應,建議在跨物種應用前進行預實驗確認。
抗體以1 mg/mL濃度保存于含0.09%疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液(PBS)中,2-8°C條件下穩定期長達兩年,這一長有效期優勢源于抗體的高純度及不含BSA等額外蛋白載體的保存體系——需注意疊氮鈉的存在可能抑制HRP活性,若用于偶聯標記或HRP底物系統,需預先去除。
2. 多平臺應用與推薦稀釋方案
本抗體適用于ELISA、免疫細胞化學(ICC)、免疫組織化學(IHC)及蛋白質印跡(WB),覆蓋了從定量分析到組織定位的多種研究場景。
酶聯免疫吸附測定(ELISA):作為檢測抗體使用時推薦稀釋范圍為1:1,000至1:30,000;若用于包被(捕獲)抗體,推薦稀釋區間為1:100至1:500。這一寬泛區間適用于夾心法ELISA中白蛋白的定量檢測,建議根據標準品曲線進行梯度優化以確定最佳工作濃度。
蛋白質印跡(WB):推薦稀釋范圍為1:1,000至1:30,000。小鼠血清白蛋白分子量約為66 kDa,在還原性SDS-PAGE中遷移位置清晰。白蛋白在血清或血漿樣本中豐度j高,建議根據樣本類型(血清、尿液、組織裂解液或細胞培養上清)適當調整上樣量——血清樣本稀釋1,000倍以上再進行WB檢測可避免信號過飽和。
免疫細胞化學(ICC)與免疫組織化學(IHC):兩者推薦稀釋范圍均為1:200至1:2,000。對于FFPE組織切片,建議進行抗原修復以暴露白蛋白表位;對于細胞爬片或涂片樣本,固定后直接孵育即可。需注意白蛋白為分泌性蛋白,在組織中的陽性信號通常定位于細胞外基質、血管腔或組織間隙。
3. 靶點特性與實驗應用場景
小鼠白蛋白由Alb基因編碼(GeneID 11657),在肝臟中合成并分泌入血。其血清水平受營養狀態、肝功能及腎臟濾過功能的綜合調節。
該抗體的典型應用場景包括:
尿液白蛋白定量**:作為檢測抗體用于ELISA體系,評估糖尿病腎病或阿霉素腎病模型中的微量白蛋白尿;
組織白蛋白滲漏檢測**:通過IHC定位血管通透性增加導致的組織間隙白蛋白沉積;
Western Blot內參選擇**:在血清或血漿樣本的蛋白電泳中,白蛋白條帶可作為高豐度內參使用;
細胞培養污染監測**:檢測血清成分在細胞培養體系中的殘留,評估胎牛血清替代品的有效性。
4. 操作要點與注意事項
白蛋白是極穩定的蛋白,在血清中含量j高,WB檢測時建議將血清樣本稀釋至1:1,000以上再行上樣,或減少上樣體積以避免條帶過曝;
該抗體不含防腐劑之外的任何穩定蛋白(如BSA),封閉液和稀釋液中需自行添加脫脂牛奶或BSA以降低非特異性吸附;
疊氮鈉會不可逆抑制HRP活性,若需使用HRP標記的二抗進行檢測(間接法),疊氮鈉已在洗滌過程中稀釋去除,不影響后續顯色;但若計劃將該抗體直接偶聯HRP,務必預先通過透析或脫鹽步驟c底除去疊氮鈉;
不同物種白蛋白存在抗原交叉可能性,應用于非小鼠樣本時建議設置適當的陰性對照。
綜上所述,這款山羊抗小鼠白蛋白多克隆抗體憑借其明確的特異性驗證、長達兩年的穩定保存期以及ELISA/ICC/IHC/WB四平臺兼容性,為涉及小鼠白蛋白檢測的各類實驗提供了靈活可靠的解決方案。
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