一、產品基本規格

項目 | 規格

靶標| USP7（泛素特異性肽酶7）

驗證反應種屬| 小鼠、人

適用應用| IHC（免疫組織化學）、IP（免疫沉淀）、WB（蛋白質印跡）

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗體形式| 完整IgG

免疫原| 人USP7蛋白第1至50位氨基酸區域

同種型| IgG

標記類型| 未偶聯（Unconjugated）

純度| 抗原親和純化

抗原種屬來源| 人

工作濃度| 1000 µg/ml

儲存條件| 2 - 8 °C

有效期| 自收貨之日起1年

緩沖體系| Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊d化鈉

二、產品制備與質量控制

本抗體由艾美捷代理Bethyl推出，貨號：A300-033A，采用抗原親和純化工藝制備，具體流程與質控參數如下：

親和純化：使用固相載體上固定的USP7特異性表位肽段進行親和層析，確保高特異性識別USP7蛋白。

表位定位：識別表位對應于人泛素特異性肽酶7（USP7）第1至50位氨基酸之間的N端區域，參考序列編號NP_003461.1（GeneID 7874）。

濃度測定：免疫球蛋白濃度通過比爾定律（Beer's Law）確定，以1 mg/mL IgG在A280波長下吸光度為1.4作為換算基準。

三、靶標生物學信息

泛素（Ubiquitin, Ub）是真核生物中高度保守的蛋白質，其與底物蛋白的共價連接是調控蛋白質活性的重要手段——被泛素標記的蛋白質通常被靶向蛋白酶體降解。去泛素化酶（Deubiquitinating enzymes, DUBs）能夠移除底物上的泛素標簽，從而將蛋白質從降解途徑中“挽救"回來。

USP7（又稱HAUSP）是泛素特異性加工蛋白酶（UBP）家族成員之一，是該家族中研究最為深入的成員之一。其經典的功能是與腫瘤抑制蛋白p53相互作用并使其穩定：USP7通過去泛素化p53，拮抗MDM2介導的p53泛素化降解，從而在DNA損傷應答、細胞周期調控及細胞凋亡中發揮關鍵作用。此外，USP7還參與調控多種其他底物蛋白的穩定性，包括PTEN、FOXO4、DNMT1等，涉及表觀遺傳調控、免疫應答及神經發育等多個生物學過程。

四、推薦實驗條件與操作要點

以下為各應用場景的推薦稀釋比例及關鍵操作參數，供實驗設計參考。

1. 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:1,000 ~ 1:5,000

抗原修復：推薦使用pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復（HIER），適用于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片。

適用范圍：組織切片中USP7蛋白的原位檢測，適用于USP7在腫瘤及正常組織中表達分布的分析。

2. 免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg抗體/毫克蛋白裂解液

適用范圍：細胞裂解液中USP7蛋白的富集，適用于去泛素化酶復合物組分分析或下游WB檢測。

操作建議：建議使用Protein A瓊脂糖珠進行免疫復合物捕獲；沉淀前建議進行預清除（Pre-clearing）步驟以降低非特異性結合。

3. 蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋比：1:10,000 ~ 1:25,000

封閉與稀釋液：5% Milk-TBST（含Tween-20的TBS緩沖液）

一抗孵育：推薦4°C孵育過夜（O/N），以確保低豐度信號的有效檢測。

二抗選擇：

-細胞裂解液WB：推薦使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（如A120-101P）進行信號放大。

-免疫沉淀物WB：推薦使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（Cat. No. S100-020），以有效降低重鏈交叉反應的干擾。

適用范圍：細胞裂解液或IP富集產物中USP7蛋白表達水平的定量及遷移行為分析。USP7預測分子量約為128 kDa。

4. 通用操作注意事項

樣本制備：推薦使用含蛋白酶抑制劑和去泛素化酶抑制劑（如N-乙基馬來酰亞胺，NEM）的裂解液制備細胞裂解物，以防止USP7底物在樣本制備過程中發生去泛素化。

陽性對照：推薦使用HeLa、293T等表達USP7水平較高的細胞系裂解液作為陽性對照。

疊氮化物注意事項：緩沖液含0.09%疊d化鈉作為防腐劑，若后續IP洗脫或WB檢測體系涉及HRP偶聯二抗，需注意疊氮化物對HRP活性的抑制作用。

五、儲存與穩定性

儲存條件：2 ~ 8°C冷藏保存，嚴禁冷凍。

有效期：自收貨之日起1年內保持穩定。

分裝建議：如需長期使用，建議按單次用量分裝后儲存于2 ~ 8°C，避免反復取用導致污染或活性下降。