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RCA滾環擴增試劑盒說明書滾環擴增(rollingcircleamplification,RCA)是近幾年發展起來的種核酸恒溫擴增方法。以環狀DNA為模板,通過個短的DNA引物(與部分環狀模板互補),在phi29DNA聚合酶催化下將dNTPs轉變成單鏈DNA,此單鏈DNA包含成百上千個重復的模板互補片段。這種方法不僅可以直接擴增DNA和RNA,還可以實現對靶核酸的信號放大,靈敏度達到個拷貝的核酸分子,因此在核酸檢測中具有很大的應用價值和潛力。因其高靈敏度、高特異性和可操作性,RCA技術在基礎研究
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蛋白質印跡(WesternBlot,WB)又稱為免疫印跡(Immunoblot),是利用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)將樣品中分子量大小不同的蛋白分開,然后通過電轉移的方法將凝膠中的蛋白定量地遷移并幾乎原位復制、固定到固相膜上,再利用抗原、抗體的特異性結合反應,特殊的抗體標記技術以及相應的檢測方法,進而對目的蛋白進行定性、相對定量檢測的技術。此項技術誕生于上世紀七十年代,近半個世紀以來經久不衰。WB實驗流程分為樣本采集,蛋白樣品制備,上樣,凝膠電泳,轉膜,封閉,一抗孵育,洗膜,二抗
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脊髓損傷(SCI)是一種難以治愈的神經疾病,目前尚無突破性的治療方法。SCI通常表現為原發性和繼發性損傷。機械性損傷,如外傷,會直接引起原發損傷。多種病理變化,包括血管損傷、脫髓鞘、炎癥反應、代謝紊亂和興奮性毒性會引起繼發性損傷。椎管內炎癥和免疫反應被認為在各種繼發性損傷機制的演變、病理發展和協調中發揮核心作用,這些機制加重了臨床神經功能缺損。SCI引發的椎管內炎癥已經得到了充分的研究,而SCI引發的炎癥反應是一種無癥狀和非自限性的炎癥級聯反應,由一系列不同類型的細胞協調,包括浸潤性免疫細胞、小
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植物總酚(TotalPhenols,TP)試劑盒說明書微量法100T/48S注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。測定意義:植物酚類物質具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有較高的營養價值和醫療保健作用而廣泛應用于化妝品、食品、醫藥等領域。測定原理:在堿性條件下,酚類物質將鎢鉬酸還原,產生藍色化合物,在760nm處有特征吸收峰,測760nm處的吸光值,即可得樣品總酚含量。自備實驗用品及儀器:天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量
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實驗方法原理葉綠素是一種二羧酸的酯,可與堿起皂化作用,產生的鹽能溶于水,可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。葉綠素與類胡蘿卜素都具有共軛雙鍵,在可見光區表現出一定的吸收光譜,可用分光鏡檢查或用分光光度計精,確測定。葉綠素吸收光量子后轉變成的激發態葉綠素分子很不穩定,當它回到基態時,可以發出紅光量子,因而產生熒光。葉綠素的化學性質也很不穩定,容易受強光的破壞,特別是當葉綠素與蛋白質分離后,破壞更快。葉綠素分子中的鎂可被H+所取代而成為褐色的去鎂葉綠素,后者遇到Cu2+可形成綠色的銅代葉綠素,這種葉綠
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電泳法,是指帶電荷的供試品(蛋白質、核苷酸等)在惰性支持介質(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)中,于電場的作用下,向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動,使組分分離成狹窄的區帶,用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。電泳技術的基本原理和分類:在電場中,推動帶電質點運動的力(F)等于質點所帶凈電荷量(Q)與電場強度(E)的乘積。F=QE質點的前移同樣要受到阻力(F)的影響,對于一個球形質點,服從Stoke定律,即:F′=6πrην式中r為質點半徑,η為介質粘度,
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PCR產物的電泳檢測時間:一般為48h以內,有些。好于當日電泳檢測,大于48h后帶型不規則甚致消失。假陰性,不出現擴增條帶。PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備,②引物的質量與特異性,③酶的質量及,④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。模板:①模板中含有雜蛋白質,②模板中含有Taq酶抑制劑,③模板中蛋白質沒有消化除凈,特別是染色體中的組蛋白,④在提取制備模板時丟失過多,或吸入酚。⑤模板核酸變性不*。在酶和引物質量好時,不出現擴增帶,極有可能是標本的消化處理,模板核酸提取過程出
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分子生物學是在生物化學基礎上發展起來的,以研究核酸和蛋白質結構、功能等生命本質的學科,在核酸、蛋白質分子水平研究發病、診斷、治療和預后的機制。其中基因工程(基因技術,基因重組)是目前分子生物學研究熱點,這些技術可以改造或擴增基因和基因產物,使微量的研究對象達到分析水平,是研究基因調控和表達的方法,也是分子水平研究疾病發生機制、基因診斷和基因治療的方法。轉化(transformation)、轉染、轉導、轉位等是自然界基因重組存在的方式,也是人工基因重組常采用的手段。基因重組的目的之一是基因克隆(g

