實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative PCR, qPCR）通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定性及定量分析。目前主要通過(guò)熒光染料或者熒光標(biāo)記的探針對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，并結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法在生物學(xué)、醫(yī)藥學(xué)上都有著廣泛的應(yīng)用。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法的應(yīng)用場(chǎng)景和范圍
DNA或RNA的絕對(duì)定量分析
包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi 基因失活率的檢測(cè)等。
基因表達(dá)差異分析
例如比較經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 (如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及 cDNA 或差顯結(jié)果的確證。基因分型。例如 SNP 檢測(cè)，甲基化檢測(cè)等。
病原體定量測(cè)定
目前，采用熒光定量 PCR 檢測(cè)技術(shù)可以對(duì)淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、肝炎病毒、結(jié)核桿菌、細(xì)小病毒 B19、EB 病毒和人巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測(cè)定。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。
藥物研發(fā)和療效研究
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確、定量、靈敏地測(cè)定血液或組織中病原體的含量，因此有利用分析藥物的作用效果，為比較不同的配方的療效、用藥量、用藥時(shí)間等等提供快速、定量的評(píng)價(jià)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法的應(yīng)用場(chǎng)景和范圍
DNA或RNA的絕對(duì)定量分析
包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi 基因失活率的檢測(cè)等。
基因表達(dá)差異分析
例如比較經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 (如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及 cDNA 或差顯結(jié)果的確證。基因分型。例如 SNP 檢測(cè)，甲基化檢測(cè)等。
病原體定量測(cè)定
目前，采用熒光定量 PCR 檢測(cè)技術(shù)可以對(duì)淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、肝炎病毒、結(jié)核桿菌、細(xì)小病毒 B19、EB 病毒和人巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測(cè)定。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。
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