這是一臺高精度、專門用于定量dsDNA、RNA、蛋白質等微量核酸和蛋白的儀器。正確使用不僅能獲得準確可靠的數(shù)據(jù)，還能延長儀器的使用壽命。以下將從操作流程、關鍵注意事項、日常維護和常見問題四個方面進行詳細說明。

一、賽默飛Qubit4.0熒光計標準操作流程

1、開機預熱：

連接電源，按下儀器后方開關啟動。

儀器會進行自檢。讓儀器預熱至少10-15分鐘，以確保光源穩(wěn)定，這是獲得準確數(shù)據(jù)的關鍵一點。

2、選擇 assay 類型：

在觸摸屏主界面選擇“新測定"。

從列表中選擇您要檢測的樣本類型，例如 “dsDNA HS (高靈敏度)" 。儀器會自動匹配所需的試劑盒和標準曲線。

3、準備標準品（強烈推薦！）：

雖然Qubit使用存儲的默認標準曲線，但為了獲得MAX 精度，特別是對于極其關鍵的樣本，建議使用試劑盒配套的標準品進行校準。

取兩個0.5mL的Qubit專用試管，分別標記為“S1"和“S2"。

按試劑盒說明書要求，向每個試管中加入190 μL的緩沖液和10 μL的標準品（S1和S2），充分混勻。總體積為200 μL。

注意：對于RNA和Protein assay，標準品的加入量可能不同，請務必查閱對應試劑盒的說明書。

4、準備樣品：

取0.5mL Qubit專用試管，進行標記。

加入199 μL的緩沖液和1 μL的待測樣本（對于DNA HS assay），充分混勻?？傮w積同樣為200 μL。

重要：樣本濃度需落在該assay的檢測范圍內（如DNA HS: 0.2 - 100 ng）。如果樣本濃度過高，需用緩沖液（Buffer） 進行稀釋，而不是用水，否則會破壞熒光信號的產生環(huán)境。

5、進行檢測：

將試管蓋緊，用無塵紙擦拭干凈管壁，避免指紋或液體影響光路。

在主界面點擊“讀取標準品"，先放入S1，點擊“讀取"，再放入S2，點擊“讀取"。校準完成后，界面會顯示“標準曲線已就緒"。

選擇“運行樣品"，依次放入準備好的樣本管，點擊“讀取"。儀器會直接顯示濃度值（如 ng/μL）。

快捷操作：如果選擇不使用標準品，可以直接選擇“使用默認曲線"來運行樣品，但精度會略有下降。

6、記錄數(shù)據(jù)和關機：

數(shù)據(jù)可以手動記錄，也可以通過USB接口導出報告。

完成后，取出所有試管，在主界面選擇“關機"。

二、日常維護與保養(yǎng)

1、清潔：

日常：每次使用后，用柔軟的無塵紙蘸取少量去離子水輕輕擦拭樣品倉。確保倉內無液體、灰塵或纖維殘留。

頑固污漬：可用70%的乙醇擦拭，但需等待乙醇揮發(fā)后再開機或放入樣品管。

2、校準：建議定期使用標準品進行校準，以確保儀器的準確性。如果實驗室溫濕度變化較大，或儀器搬動后，也應進行校準。

3、環(huán)境：將儀器放置在穩(wěn)定、潔凈、干燥的實驗臺上，避免陽光直射和強烈的振動。

三、見問題與解決（Troubleshooting）

1、讀數(shù)不穩(wěn)定或波動大：

原因：試管壁不干凈（有指紋、液體）、試管未放到底、氣泡過多、樣本未充分混勻。

解決：擦拭試管，確保放置到位，渦旋振蕩混勻樣本。

2、錯誤：“濃度過高"：

原因：樣本濃度超出檢測范圍。

解決：用相應的緩沖液稀釋樣本后重新檢測。

3、錯誤：“濃度過低"或負值：

原因：樣本濃度低于檢測下限，或緩沖液/水中有熒光污染物。

解決：檢查使用的緩沖液是否純凈。確認檢測的是否為超微量樣本。

4、結果與NanoDrop或其他儀器差異大：

原因：這是正?，F(xiàn)象。Qubit基于熒光染料特異性結合目的分子（如雙鏈DNA），因此受鹽、蛋白、游離核苷酸等雜質影響小，結果更準確反映有效濃度。而NanoDrop基于紫外吸收，任何在260nm有吸收的物質（如RNA、降解DNA、胍鹽）都會干擾結果，導致虛高。

結論：Qubit的結果對于下游需要精確DNA量的實驗（如NGS建庫、qPCR）更具參考價值。

四、總結

正確合理的用法：

預熱 → 選方法 → (建議校準) → 精確配制樣品(專用管+緩沖液+準確體積) → 孵育 → 清潔上機 → 在范圍內讀數(shù) → 妥善維護。

遵循以上步驟和注意事項，您就能充分發(fā)揮Qubit 4.0準確、靈敏的優(yōu)勢，為您的實驗提供可靠的數(shù)據(jù)支持。對于使用或更換檢測類型，請務必詳細閱讀試劑盒說明書。