產品分類品牌分類

光學儀器: USHIO牛尾檢查光源裝置檢查燈顯微鏡相機徠卡Mateo TL倒置數字顯微鏡孚約顯微鏡攝像頭相機蔡司Axioscope 7光學顯微鏡蔡司Stemi 508體視顯微鏡奧林巴斯顯微鏡熒光裝置相差顯微鏡工業顯微鏡材料顯微鏡金相顯微鏡偏光顯微鏡奧林巴斯GX31P偏光顯微鏡奧林巴斯GX41倒置顯微鏡奧林巴斯GX71倒置顯微鏡奧林巴斯GX51倒置顯微鏡奧林巴斯BX41熒光顯微鏡奧林巴斯BX51熒光顯微鏡奧林巴斯CKX31倒置顯微鏡奧林巴斯CKX41倒置顯微鏡 Leica徠卡S9 E體視顯微鏡徠卡DMi8倒置顯微鏡尼康SMZ1270體視顯微鏡奧林巴斯GX53倒置顯微鏡奧林巴斯CX22生物顯微鏡奧林巴斯BX53M金相顯微鏡 Leica徠卡A60 F體視顯微鏡 Leica徠卡M205 C體視型顯微鏡 Leica徠卡M165 C體視顯微鏡 Leica徠卡M50體視顯微鏡奧林巴斯BX63生物顯微鏡徠卡M125 C體視顯微鏡徠卡DM2500生物顯微鏡奧林巴斯IX83倒置顯微鏡奧林巴斯顯微鏡鏡頭 Nikon尼康SMZ25體視顯微鏡 Nikon尼康LV100ND POL-DS偏光顯微鏡 Nikon尼康LV100N POL生物顯微鏡 Nikon尼康SMZ800N體式顯微鏡 Nikon尼康SMZ1270體視顯微鏡奧林巴斯SZX16體視顯微鏡奧林巴斯SZX10體視顯微鏡奧林巴斯SZX7體視顯微鏡尼康TS2-FL倒置顯微鏡徠卡DMi1倒置顯微鏡徠卡DM3000生物顯微鏡徠卡DM2000生物顯微鏡徠卡DM1000生物顯微鏡徠卡DM750生物顯微鏡徠卡DM500生物顯微鏡尼康E200生物顯微鏡尼康SMZ745T體視顯微鏡尼康SMZ745體視顯微鏡尼康Si生物顯微鏡尼康Ei生物顯微鏡奧林巴斯IX73倒置顯微鏡奧林巴斯SZ61體視顯微鏡奧林巴斯SZ51體視顯微鏡奧林巴斯BX53生物顯微鏡奧林巴斯BX43生物顯微鏡奧林巴斯CX43生物顯微鏡顯微鏡尼康Ts2倒置顯微鏡奧林巴斯CKX53倒置顯微鏡奧林巴斯CX33生物顯微鏡奧林巴斯CX23生物顯微鏡生物顯微鏡體視顯微鏡熒光顯微鏡倒置顯微鏡

生命科學: 賽默飛PowerFlex梯度PCR 賽默飛超微量分光光度計潔凈工作臺宏石實時熒光定量PCR BioRad伯樂PTC Tempo梯度pcr 細胞破碎儀賽默飛240i二氧化碳CO2培養箱賽默飛311二氧化碳CO2培養箱賽默飛371二氧化碳CO2培養箱賽默飛i160二氧化碳CO2培養箱賽默飛NanoDropOneC紫外光度計賽默飛NanoDropOne紫外光度計艾本德Mastercycler® X50s PCR 賽默飛Qubit Flex分光光度計賽默飛細胞計數光立方賽默飛VeritiPro PCR儀賽默飛QuantStudio7 賽默飛QuantStudio5 PCR 賽默飛QuantStudio3 PCR 伯樂CFX Connect PCR儀伯樂S1000 PCR儀伯樂C1000 Touch PCR 儀伯樂CFX Opus 96 PCR 伯樂CFX Duet熒光定量PCR 伯樂CFX Opus Deepwell 伯樂TC20細胞計數器賽默飛QuantStudio1 PCR 賽默飛StepOnePlus實時熒光定量PCR 賽默飛7500實時熒光定量PCR 賽默飛ProFlex 3x32梯度PCR 賽默飛SimpliAmp PCR儀賽默飛MiniAmpPlus PCR儀賽默飛MiniAmp普通PCR儀賽默飛Qubit4.0分光光度計賽默飛Countess™ 3細胞計數儀賽默飛Countess™ 3FL細胞計數儀伯樂T100 光度計蛋白印跡儀凝膠成像系統 PCR儀酶標儀洗板機電穿孔儀樣本破碎細胞計數儀電泳儀電泳槽伯樂T100梯度PCR儀核酸定量儀熒光計實時熒光定量PCR儀

實驗通用: 默克密理博Millicell-IQ純水凈化系統賽默飛程控降溫儀冷凍機艾本德5702離心機艾本德5430微量離心機艾本德5810微量離心機冷凍離心機賽默飛CryoExtra液氮罐賽默飛Sorvall LYNX 6000 離心機賽默飛Sorvall LYNX 4000離心機賽默飛1500系列生物安全柜賽默飛1300系列安全生物柜賽默飛4111FO水套式CO2培養箱賽默飛311 CO2培養箱賽默飛371直熱式CO2培養箱賽默飛3111水套式CO2培養箱賽默飛i160直熱式CO2培養箱艾本德5804R冷凍離心機賽默飛ST4R冷凍離心機賽默飛ST4離心機賽默飛Micro21R冷凍離心機賽默飛Micro21微量離心機賽默飛Micro17微量離心機精騏擺床精騏混勻儀精騏干式恒溫器精騏振蕩器/搖床 CryStal精騏振蕩器/搖床賽默飛ST40離心機賽默飛ST1 Plus離心機大龍離心機大龍移液器大龍金屬浴大龍搖床大龍混勻儀振蕩器凱杰樣本研磨儀TissueLyser III 艾本德5430R冷凍離心機艾本德5425R冷凍離心機艾本德5425微量離心機艾本德5420微量離心機艾本德MiniSpin離心機離心機轉子轉頭賽默飛ST1R冷凍離心機加熱模塊混勻儀熱蓋賽默飛mySPIN-6Mini離心機賽默飛ST8R冷凍離心機賽默飛Pico21微量離心機賽默飛Pico17微量離心機艾本德5810R冷凍離心機艾本德ThermoMixer C混勻儀賽默飛Micro17R冷凍離心機賽默飛Fresco17冷凍離心機賽默飛Fresco21冷凍離心機電子天平水分測定儀電導率儀磁力攪拌器標準培養箱電阻儀二氧化碳培養箱濃縮儀分光光度計分度計低溫冰箱程序降溫儀酸度計PH計儲存液氮罐搖床小型臺式離心機滅菌鍋水分儀天平萬分之一藥品冷藏箱恒溫振蕩器混勻攪拌器超凈工作臺電化學儀器生化培養箱干燥箱烘箱恒溫水浴鍋光譜色譜儀

耗材血清: 瓶口分液器檢測管艾本德移液器試劑盒移液器移液管離心管 PCR管凍存管培養瓶培養板培養皿胎牛血清清潔消毒劑

查看更多分類

thermofisher賽默飛QuantStudio5實時熒光定量PCR儀正確操作使用方法

時間：2025/12/23閱讀：728

賽默飛QuantStudio 5實時熒光定量PCR儀的正確操作使用方法指南。它將分為實驗準備、上機操作、運行監控和后續處理幾個部分，并包含重要的注意事項。

一、賽默飛QuantStudio5實時熒光定量PCR重要部分：實驗準備

1、儀器準備：

（1）開啟電腦和QuantStudio 5儀器電源，等待系統啟動完成。

（2）打開 QuantStudio Design and Analysis 軟件。

（3）檢查儀器狀態，確保無錯誤報警。

2、實驗設計：

在軟件中或紙上規劃好實驗布局，包括：

（1）實驗類型：標準曲線定量、相對定量（ΔΔCt）、基因分型等。

（2）樣品位置：明確標準品、待測樣品、陰性對照（NTC）、陽性對照（PC）在板子上的位置。

（3）探針/染料設置：確定每個孔使用的熒光染料通道（如FAM, VIC, ROX參比染料等）。

3、反應體系配制（在試劑準備區進行）：

（1）根據試劑盒說明書或優化后的方案，計算并配制主混合液。

（2）通常包括：SYBR Green qPCR預混液（或TaqMan探針預混液）、正反向引物、探針（如果使用）、無酶水。

（3）將主混合液分裝到PCR板或八連管中。

注意：整個過程在冰上操作，避免酶失活。

二、賽默飛QuantStudio5實時熒光定量PCR第二部分：上機運行

1、放置樣品板：

（1）打開QuantStudio 5的樣品槽門。

（2）注意板子方向：將板子帶有A1角標（左上角）的一側對準樣品槽的對應角落，平穩放入。

（3）輕輕關上樣品槽門。

2、創建并設置新實驗：

（1）在軟件主界面點擊 "New" 或 "創建新實驗"。

（2）選擇實驗類型：如 Quantitation (定量) -> Standard Curve (標準曲線) 或 Quantitation - Comparative Ct (ΔΔCt)。

（3）選擇板子類型：如96-well, 0.1 mL。

3、設置實驗參數：

（1）指定樣品：在軟件界面的虛擬板圖上，用鼠標選擇孔位，然后右鍵或從側邊欄設置其類型（Unknown, Standard, NTC等）和樣品名稱。

（2）指定探針/染料：為每個孔分配檢測通道。例如，在 Detector 或 Assay 欄選擇或創建對應的染料（如FAM-SYBR）。

（3）設置參比染料：通常選擇ROX作為參比染料，用于校正孔間差異。

4、編輯反應程序：

點擊 Protocol 選項卡，輸入以下典型的qPCR三步法程序：

（1）階段1：UNG酶消化（可選，防污染）

50°C，2分鐘

（2）階段2：熱啟動/預變性

95°C，2-10分鐘（根據預混液說明書）

（3）階段3：PCR循環（40-45個循環）

變性： 95°C，15秒

退火/延伸： 60°C，1分鐘（在此步驟采集熒光信號）

（4）對于SYBR Green法，通常在退火/延伸結束時采集信號；對于TaqMan探針法，確保設置正確。

5、啟動運行：

（1）檢查所有參數設置無誤后，點擊 "Start Run"。

（2）軟件會提示你輸入實驗名稱、保存路徑等信息。

（3）確認后，儀器將開始運行。你可以聽到風扇啟動和溫控模塊開始工作的聲音。

三、第三部分：運行監控與數據分析

1、實時監控：

（1）在運行過程中，軟件會實時顯示擴增曲線、熒光信號圖等。

（2）檢查陰性對照（NTC）是否有擴增，陽性對照和標準品曲線是否正常。

2、運行結束：

（1）程序運行完畢后，儀器會發出提示音。

（2）軟件會自動保存數據。

3、數據分析：

（1）在Analysis界面，軟件會根據你選擇的實驗類型自動計算Ct值。

（2）對于標準曲線：檢查標準曲線的斜率和R2值（理想斜率：-3.3， R2 > 0.99）。

（3）對于熔解曲線（SYBR Green）：檢查產物特異性，單一峰表明擴增特異。

（4）設置基線（Baseline）和閾值（Threshold），確保它們設置在擴增曲線的指數增長期。

（5）導出數據結果進行進一步分析。

四、第四部分：運行后處理

1、取出樣品板：

（1）待儀器溫度降至安全范圍后（通常為4°C或室溫），打開樣品槽門，取出樣品板。

（2）注意：板子和樣品可能含有擴增產物，是潛在的污染源。請按照生物危害廢棄物處理規定進行處理。

2、關機：

（1）通常情況下，儀器無需關閉電源，保持待機狀態即可。如果長期不用，可關閉儀器和電腦電源。

（2）填寫儀器使用記錄。

五、常見問題排查

1、信號弱或無信號：檢查試劑是否失效、探針/引物設計是否合理、模板濃度是否過低、程序設置是否正確（特別是信號采集步驟）。

2、擴增曲線異常：檢查是否存在抑制劑、模板降解或加樣錯誤。

3、NTC出現擴增：表明存在污染，需檢查試劑、水、耗材或操作環境。

4、ROX信號報警：檢查是否在實驗中設置了ROX參比染料，但使用的預混液不含ROX，或反之。

thermofisher賽默飛QuantStudio5實時熒光定量PCR儀正確操作使用方法

會員登錄

收藏該商鋪

提示