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賽默飛steponeplus實時熒光定量PCR儀需要使用哪些耗材和試劑？

時間：2025/12/30閱讀：533

賽默飛StepOnePlus實時熒光定量PCR儀所需的耗材和試劑。總的來說，可以分為兩大部分：核心耗材（儀器運行必需）和反應試劑（實驗成功必需）。

一、賽默飛StepOnePlus實時熒光定量PCR核心高耗材

1、反應板

這是承載PCR反應體系的容器，必須與儀器適配。

（1）96孔板：常用的規格，與StepOnePlus的標準模塊匹配。

推薦品牌：賽默飛原廠的 MicroAmp™ Fast 96-Well Reaction Plate (0.1 mL) 是選擇，光學性能良好。

其他兼容品牌：也可以選擇其他品牌的兼容96孔板，但必須確保是光學平蓋或光學凸蓋，并且材質能承受快速升降溫。

（2）0.2 mL單管或八聯管

如果您需要更高的靈活性或通量不高，可以使用0.2 mL的單管或八聯管，并配合相應的96孔板架。

推薦：賽默飛原廠的 MicroAmp™ 8-Tube Strips 和 MicroAmp™ Clear Adhesive Film。

2、封板膜

用于密封反應板，防止樣品蒸發和交叉污染。至關重要，密封不嚴會導致實驗失敗。

（1）光學透明粘性封膜：常用的一種，適用于絕大多數實驗。

推薦：賽默飛原廠的 MicroAmp™ Optical Adhesive Film。

（2）熱封膜：使用專門的封膜機進行熱封，密封效果好，但需要額外設備。

重要提示：StepOnePlus是一款塊狀基因擴增儀，它不能使用平板式離心機進行離心。如果需要對封膜后的板進行離心，必須使用專為96孔板設計的掌上離心機。

二、反應試劑

這部分是進行熒光定量PCR反應本身所需的化學物質。

1、核心反應混合物

這是PCR反應的主體，通常以2x預混液的形式提供，包含了DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等。

（1）SYBR Green法：如果您使用SYBR Green染料法進行檢測。

推薦：賽默飛原廠的 PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix 性能非常出色。其他如 Power SYBR™ Green PCR Master Mix 也是經典選擇。

（2）TaqMan探針法：如果您使用水解探針法進行檢測。

推薦：賽默飛原廠的 TaqMan™ Fast Advanced Master Mix 或 Universal Master Mix II。

2、引物和探針

（1）SYBR Green法：需要針對您的目標基因設計并合成特異性引物。

（2）TaqMan探針法：需要針對您的目標基因設計并合成特異性引物和標記了熒光基團（如FAM）和淬滅基團（如TAMRA/MGB）的探針。

3、模板DNA/cDNA

您要檢測的樣品，例如從細胞、組織中提取的基因組DNA，或由RNA反轉錄得到的cDNA。

4、無核酸酶水

用于稀釋和調整反應體系體積。

三、總結清單

為了方便您準備，這里是一個簡潔的清單：

1、核心耗材

96孔反應板 (0.1 mL)：承載PCR反應液，必須光學透明

光學透明粘性封膜：密封反應板，防止蒸發和污染

(可選) 0.2 mL 八聯管 & 管架：提供更靈活的實驗方案

2、反應試劑

qPCR預混液 (2X Master Mix) ：PCR反應核心組分，根據染料法或探針法選擇

引物 (Primers) ：特異性擴增目標片段

(探針法) 熒光探針：特異性檢測并報告目標片段擴增

模板DNA/cDNA：待檢測的樣品。

賽默飛steponeplus實時熒光定量PCR儀需要使用哪些耗材和試劑？

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