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biorad伯樂T100梯度PCR儀做實驗常用的染料有哪些?

時間:2026/1/9閱讀:403
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伯樂(Bio-Rad)的T100是一款非常經典和可靠的梯度PCR儀,其熱蓋設計使得它能夠兼容多種類型的PCR管和板,因此在染料的選擇上非常靈活??偟膩碚f,用于T100 PCR儀的染料可以分為兩大類:


一、伯樂T100PCR儀實時熒光定量PCR染料

這類染料在反應過程中與DNA結合并發出熒光,通過儀器實時監測熒光信號來對DNA進行定量。T100本身是普通PCR儀,不能做qPCR。但如果您是為后續在qPCR儀上進行檢測而準備樣品,那么您會在T100上進行qPCR反應的“擴增"步驟。常用的染料/探針包括:

1、SYBR Green I

原理:一種常用的DNA結合染料,可嵌入DNA雙鏈的小溝中,結合后熒光信號大大增強。

優點:成本低,使用方便,無需設計探針,適用于多種實驗。

缺點:特異性稍差,會與任何雙鏈DNA(包括引物二聚體)結合,可能導致假陽性。需要通過熔解曲線分析來確認產物的特異性。

2、TaqMan 探針

原理:一種序列特異性的寡核苷酸探針,兩端分別標記有報告熒光基團和淬滅基團。當PCR擴增發生時,Taq酶的5‘→3’外切酶活性會降解探針,使報告基團與淬滅基團分離,從而發出熒光。

優點:特異性高,因為只有目的片段被擴增時才會產生熒光信號。

缺點:需要針對每個靶序列設計并合成特異的探針,成本較高。

3、EvaGreen

原理:與SYBR Green I類似,也是一種結合雙鏈DNA的染料。

優點:熒光信號更強,穩定性更好,對PCR的抑制性比SYBR Green I小,尤其適合高分辨率熔解曲線分析。

缺點:成本通常比SYBR Green I略高。


二、伯樂T100PCR儀終點法PCR檢測染料

這類染料用于在PCR反應結束后,通過瓊脂糖凝膠電泳來檢測擴增產物。您需要將染料與PCR產物混合,然后上樣跑膠。

1、GelRed / GelGreen

優點:是目前安全、敏感的核酸凝膠染料之一,其誘變毒性遠低于傳統的EB(溴化乙錠)。熒光信號強,背景低。

使用方式:可以添加到熔化的瓊脂糖凝膠中,或者在電泳前與PCR產物直接混合。

2、SYBR Safe

優點:由賽默飛公司推出,被宣傳為一種安全的EB替代品。在藍光或紫外光下均可激發。

使用方式:同GelRed。

3、溴化乙錠

注意:EB是一種強誘變劑,有潛在的健康風險,目前不推薦使用。盡管它非常便宜且檢測效果穩定,但出于安全考慮,實驗室已普遍用上述 safer dyes 替代。

4、常規DNA上樣緩沖液

通常含有溴酚藍和/或二甲苯青作為指示劑,以及甘油來增加樣品密度。它們本身不是DNA染料,但必須與上述DNA染料配合使用,以便于上樣和監控電泳進程。


三、實用建議:

1、如果您做的是普通PCR,跑膠看結果:請選擇 GelRed 或 GelGreen。它們安全、效果好,是現在的黃金標準。

2、如果您是為qPCR準備樣品:請根據您的實驗設計、預算和對特異性的要求,在預混液中選擇 SYBR Green 或 TaqMan Probe 體系。伯樂T100可以地運行這些qPCR預混液中的擴增程序。


重要提示:無論使用哪種染料,請務必遵循您所購買的預混液或染料說明書上的推薦PCR程序和建議的染料濃度。

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