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thermo賽默飛VeririPro96梯度PCR儀實驗常用的染料有哪些?

時間:2026/2/3閱讀:340
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Thermo Fisher Scientific(賽默飛世爾科技)的 VeritiPro 96 孔梯度PCR儀是一款高性能的熱循環(huán)儀,它本身不檢測熒光,因此它不直接限定使用哪種染料。其核心功能是提供精確的溫度控制和梯度PCR功能。在VeritiPro 96上進行的實驗,所使用的染料取決于實驗的目的和檢測方法。以下是搭配該儀器常用的幾種染料類型及其對應的實驗:


一、賽默飛VeritiPro96終點法PCR(常規(guī)PCR)常用染料

1、溴化乙錠:傳統(tǒng)染料,但因其強致癌性,現(xiàn)在實驗室已較少使用。

2、SYBR Safe DNA 凝膠染料:賽默飛自家的明星產品,安全性高,熒光信號強,是常用的替代品。其激發(fā)和發(fā)射波長與EB相近,可用同樣的凝膠成像系統(tǒng)觀察。

3、GelRed / GelGreen:其他品牌的常用安全型核酸凝膠染料。

4、簡單的DNA結合染料:如在PCR預混液中常添加的SYBR Green I(但注意,這里添加是為了終點檢測,而非qPCR的實時監(jiān)測)。


二、實時熒光定量PCR(qPCR)常用染料/探針

當VeritiPro 96用于配制qPCR反應體系,然后轉移到實時熒光定量PCR儀(如賽默飛的QuantStudio系列)上運行時,會用到以下染料:

1、SYBR Green I:常用的DNA結合染料。它特異性結合雙鏈DNA,在每次擴增循環(huán)后測量熒光,用于定量和熔解曲線分析。優(yōu)點是成本低、使用簡便;缺點是對非特異性產物和引物二聚體也會產生信號。

2、TaqMan 探針:基于FRET原理的水解探針。它帶有一個報告熒光基團和一個淬滅基團,特異性高,適用于多重檢測和SNP分型等。賽默飛擁有大量成熟的TaqMan探針 assays。

3、其他探針:如分子信標、Scorpions探針等,也用于特定的qPCR實驗,原理與TaqMan類似,但結構不同。


三、高分辨率熔解曲線分析(HRM)常用染料

如果實驗后續(xù)需要進行HRM分析以進行基因分型、突變掃描等,需要使用專用的飽和染料。

1、EvaGreen:常用的HRM染料之一。它是一種飽和染料,在DNA熔解過程中不會發(fā)生重排,能產生高精度的熔解曲線。

2、SYTO 9 等:其他類型的飽和DNA結合染料,也適用于HRM分析。


四、重要總結與注意事項

1、儀器角色:VeritiPro 96是熱循環(huán)儀,負責“變溫-擴增"。它不負責“讀熒光"。因此,染料選擇取決于你的下游檢測平臺(凝膠成像系統(tǒng) or qPCR儀)和實驗目的(常規(guī)克隆、定量、基因分型等)。

2、兼容性:

對于終點PCR:只需確保染料與你的凝膠成像系統(tǒng)的光源和濾光片匹配(SYBR Safe 通常兼容EB的設定)。

對于qPCR:必須確保你選擇的染料/探針(如SYBR Green或FAM/TAMRA標記的TaqMan探針)與你的實時熒光定量PCR儀的光學系統(tǒng)兼容。VeritiPro 96不參與此環(huán)節(jié)。

3、預混液:大多數(shù)現(xiàn)代實驗室使用商業(yè)化的PCR或qPCR預混液,這些預混液通常已經優(yōu)化并包含了合適的DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液以及染料(如SYBR Green I for qPCR)。你只需要加入模板、引物和水即可。賽默飛的 PowerUp SYBR Green Master Mix 和 TaqMan Fast Advanced Master Mix 就是非常常見的例子。

4、梯度功能與染料:VeritiPro 96的梯度功能主要用于優(yōu)化退火溫度。這在建立新的終點法PCR或qPCR實驗時非常有用。染料的選擇不影響梯度功能的使用,但優(yōu)化后的反應條件會使染料的信號更特異、更清晰。


五、結論:

在VeritiPro 96梯度PCR儀上?!笆褂?的染料,實際上是與你實驗流程相匹配的染料:

1、日常克隆、鑒定:SYBR Safe(跑膠用)。

2、實時定量PCR(qPCR):SYBR Green I 或 TaqMan 探針(在專用的qPCR儀上檢測)。

3、高分辨率熔解分析:EvaGreen 等飽和染料。


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