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光學儀器: USHIO牛尾檢查光源裝置檢查燈顯微鏡相機徠卡Mateo TL倒置數字顯微鏡孚約顯微鏡攝像頭相機蔡司Axioscope 7光學顯微鏡蔡司Stemi 508體視顯微鏡奧林巴斯顯微鏡熒光裝置相差顯微鏡工業顯微鏡材料顯微鏡金相顯微鏡偏光顯微鏡奧林巴斯GX31P偏光顯微鏡奧林巴斯GX41倒置顯微鏡奧林巴斯GX71倒置顯微鏡奧林巴斯GX51倒置顯微鏡奧林巴斯BX41熒光顯微鏡奧林巴斯BX51熒光顯微鏡奧林巴斯CKX31倒置顯微鏡奧林巴斯CKX41倒置顯微鏡 Leica徠卡S9 E體視顯微鏡徠卡DMi8倒置顯微鏡尼康SMZ1270體視顯微鏡奧林巴斯GX53倒置顯微鏡奧林巴斯CX22生物顯微鏡奧林巴斯BX53M金相顯微鏡 Leica徠卡A60 F體視顯微鏡 Leica徠卡M205 C體視型顯微鏡 Leica徠卡M165 C體視顯微鏡 Leica徠卡M50體視顯微鏡奧林巴斯BX63生物顯微鏡徠卡M125 C體視顯微鏡徠卡DM2500生物顯微鏡奧林巴斯IX83倒置顯微鏡奧林巴斯顯微鏡鏡頭 Nikon尼康SMZ25體視顯微鏡 Nikon尼康LV100ND POL-DS偏光顯微鏡 Nikon尼康LV100N POL生物顯微鏡 Nikon尼康SMZ800N體式顯微鏡 Nikon尼康SMZ1270體視顯微鏡奧林巴斯SZX16體視顯微鏡奧林巴斯SZX10體視顯微鏡奧林巴斯SZX7體視顯微鏡尼康TS2-FL倒置顯微鏡徠卡DMi1倒置顯微鏡徠卡DM3000生物顯微鏡徠卡DM2000生物顯微鏡徠卡DM1000生物顯微鏡徠卡DM750生物顯微鏡徠卡DM500生物顯微鏡尼康E200生物顯微鏡尼康SMZ745T體視顯微鏡尼康SMZ745體視顯微鏡尼康Si生物顯微鏡尼康Ei生物顯微鏡奧林巴斯IX73倒置顯微鏡奧林巴斯SZ61體視顯微鏡奧林巴斯SZ51體視顯微鏡奧林巴斯BX53生物顯微鏡奧林巴斯BX43生物顯微鏡奧林巴斯CX43生物顯微鏡顯微鏡尼康Ts2倒置顯微鏡奧林巴斯CKX53倒置顯微鏡奧林巴斯CX33生物顯微鏡奧林巴斯CX23生物顯微鏡生物顯微鏡體視顯微鏡熒光顯微鏡倒置顯微鏡

生命科學: 賽默飛PowerFlex梯度PCR 賽默飛超微量分光光度計潔凈工作臺宏石實時熒光定量PCR BioRad伯樂PTC Tempo梯度pcr 細胞破碎儀賽默飛240i二氧化碳CO2培養箱賽默飛311二氧化碳CO2培養箱賽默飛371二氧化碳CO2培養箱賽默飛i160二氧化碳CO2培養箱賽默飛NanoDropOneC紫外光度計賽默飛NanoDropOne紫外光度計艾本德Mastercycler® X50s PCR 賽默飛Qubit Flex分光光度計賽默飛細胞計數光立方賽默飛VeritiPro PCR儀賽默飛QuantStudio7 賽默飛QuantStudio5 PCR 賽默飛QuantStudio3 PCR 伯樂CFX Connect PCR儀伯樂S1000 PCR儀伯樂C1000 Touch PCR 儀伯樂CFX Opus 96 PCR 伯樂CFX Duet熒光定量PCR 伯樂CFX Opus Deepwell 伯樂TC20細胞計數器賽默飛QuantStudio1 PCR 賽默飛StepOnePlus實時熒光定量PCR 賽默飛7500實時熒光定量PCR 賽默飛ProFlex 3x32梯度PCR 賽默飛SimpliAmp PCR儀賽默飛MiniAmpPlus PCR儀賽默飛MiniAmp普通PCR儀賽默飛Qubit4.0分光光度計賽默飛Countess™ 3細胞計數儀賽默飛Countess™ 3FL細胞計數儀伯樂T100 光度計蛋白印跡儀凝膠成像系統 PCR儀酶標儀洗板機電穿孔儀樣本破碎細胞計數儀電泳儀電泳槽伯樂T100梯度PCR儀核酸定量儀熒光計實時熒光定量PCR儀

實驗通用: 默克密理博Millicell-IQ純水凈化系統賽默飛程控降溫儀冷凍機艾本德5702離心機艾本德5430微量離心機艾本德5810微量離心機冷凍離心機賽默飛CryoExtra液氮罐賽默飛Sorvall LYNX 6000 離心機賽默飛Sorvall LYNX 4000離心機賽默飛1500系列生物安全柜賽默飛1300系列安全生物柜賽默飛4111FO水套式CO2培養箱賽默飛311 CO2培養箱賽默飛371直熱式CO2培養箱賽默飛3111水套式CO2培養箱賽默飛i160直熱式CO2培養箱艾本德5804R冷凍離心機賽默飛ST4R冷凍離心機賽默飛ST4離心機賽默飛Micro21R冷凍離心機賽默飛Micro21微量離心機賽默飛Micro17微量離心機精騏擺床精騏混勻儀精騏干式恒溫器精騏振蕩器/搖床 CryStal精騏振蕩器/搖床賽默飛ST40離心機賽默飛ST1 Plus離心機大龍離心機大龍移液器大龍金屬浴大龍搖床大龍混勻儀振蕩器凱杰樣本研磨儀TissueLyser III 艾本德5430R冷凍離心機艾本德5425R冷凍離心機艾本德5425微量離心機艾本德5420微量離心機艾本德MiniSpin離心機離心機轉子轉頭賽默飛ST1R冷凍離心機加熱模塊混勻儀熱蓋賽默飛mySPIN-6Mini離心機賽默飛ST8R冷凍離心機賽默飛Pico21微量離心機賽默飛Pico17微量離心機艾本德5810R冷凍離心機艾本德ThermoMixer C混勻儀賽默飛Micro17R冷凍離心機賽默飛Fresco17冷凍離心機賽默飛Fresco21冷凍離心機電子天平水分測定儀電導率儀磁力攪拌器標準培養箱電阻儀二氧化碳培養箱濃縮儀分光光度計分度計低溫冰箱程序降溫儀酸度計PH計儲存液氮罐搖床小型臺式離心機滅菌鍋水分儀天平萬分之一藥品冷藏箱恒溫振蕩器混勻攪拌器超凈工作臺電化學儀器生化培養箱干燥箱烘箱恒溫水浴鍋光譜色譜儀

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伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔操作指南

時間：2026/3/5閱讀：403

伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔系統的標準化操作指南，適用于哺乳動物、植物、真菌等真核細胞的電轉染實驗。請嚴格遵循生物安全與儀器操作規范：

一、伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔系統實驗前準備

A、儀器與耗材

1、Gene Pulser Xcell主機、電轉杯槽、電轉杯（建議使用預冷4℃的0.4 cm或0.2 cm間隙電轉杯）

2、電轉緩沖液（如預冷的PBS、HBSS或無血清培養基，低離子強度可減少電弧風險）

3、目標核酸（質粒DNA、siRNA等，需高純度、無菌，溶于低鹽緩沖液如TE）

4、冰浴容器、計時器、移液器及無菌吸頭

B、參數設定

參考常見真核細胞參數范圍（需根據細胞類型優化）

1、電壓：100-500 V（哺乳動物細胞常用200-300 V）

2、電容：500-1000 μF（高電容適用于較大細胞）

3、脈沖次數：1-2次

4、脈沖間隔：≥1 s（若為雙脈沖）

5、波形：選擇指數衰減波（Exponential Decay）

二、伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔系統操作步驟

1、系統啟動

連接電源，打開主機開關，系統自檢后進入主界面。

2、程序設置

（1）按下"Protocol"鍵，選擇Exponential模式。

（2）輸入目標參數（參考優化后的電壓、電容、脈沖數）。

（3）保存程序（可選）以備重復使用。

3、樣本準備

（1）細胞洗滌：用預冷電轉緩沖液洗滌細胞2次，重懸至目標密度。

（2）混合樣本：將細胞懸液與核酸輕柔混合。

（3）保持樣本全程冰浴（降低細胞代謝，提高存活率）。

4、電轉操作

（1）將混合液轉移至預冷的電轉杯中（避免氣泡，氣泡會導致電弧）。

（2）擦干電轉杯外壁水漬，放入電轉槽（注意正負極方向）。

（3）按下"Pulse"鍵，觀察脈沖放電（伴隨蜂鳴聲）。

（4）屏幕顯示實際電壓與脈沖時間，記錄實際時間常數（τ）。

5、細胞復蘇

（1）電擊后立即將細胞轉入預熱的培養基中。

（2）輕柔吹打混勻，轉移至培養皿，放入37℃ CO?培養箱。

（3）根據實驗目的，在24-72小時后檢測轉染效率。

三、關鍵參數優化建議

1、電壓與電容平衡：

（1）高電壓+低電容 → 適合小細胞（如淋巴細胞）

（2）低電壓+高電容 → 適合大細胞（如成纖維細胞）

2、時間常數（τ）評估：

（1）τ < 5 ms：可能電壓過高或緩沖液離子強度過低

（2）τ > 30 ms：可能電容過高或細胞密度過大

3、細胞狀態控制：

（1）使用低傳代次數細胞（< P20）

（2）電轉前血清饑餓處理可能提高某些細胞系的轉染效率。

四、安全與注意事項

1、電弧預防：

（1）確保電轉杯外壁干燥、無裂痕

（2）避免緩沖液離子濃度過高（推薦使用低電導緩沖液）

（3）核酸樣本避免含酚、乙醇等殘留

2、生物安全：

（1）電轉后廢棄物需按生物危害材料處理

（2）實驗臺面用70%乙醇擦拭，防止核酸污染

3、儀器維護：

（1）定期用乙醇清潔電轉槽

（2）長時間不用時斷開電源

五、常見問題排查

1、細胞存活率低

可能原因：電壓過高/緩沖液不適

解決方案：降低電壓，更換緩沖液優化

2、轉染效率低

可能原因：核酸純度不足/細胞狀態差

解決方案：重新純化核酸，使用新鮮細胞

3、電弧現象

可能原因：電轉杯有氣泡或裂痕

解決方案：輕柔混合，更換新電轉杯

4、儀器無脈沖輸出

可能原因：程序設置錯誤/電容未充電

解決方案：檢查參數設置，重啟儀器

伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔操作指南

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