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賽默飛veritipro384孔梯度PCR儀部分孔無擴增

時間：2026/5/11閱讀：210

賽默飛VeritiPro384孔梯度PCR儀出現部分孔無擴增（其他孔正常）的情況，請按以下步驟系統排查。注意：先確認無擴增孔是否具有規律性（如邊緣、特定列/行、或隨機分布），這能快速指向原因。

一、檢查樣品與試劑操作問題

384孔板加樣量小（通常5–20μL），易發生加樣遺漏、蒸發或封膜不嚴。

1、復查加樣記錄：確認無擴增孔是否恰好是某些引物/模板/酶缺失的孔。可重新運行這些孔的反應（單管或小批量）驗證。

2、檢查封膜與熱蓋：

（1）使用適配384孔板的光學透明封膜，并用力壓實，避免邊緣翹起。

（2）確保熱蓋溫度設為105°C左右，且熱蓋旋鈕（若有）擰緊，使熱蓋均勻壓住板面。

（3）觀察反應后液面：若某些孔液面明顯下降，說明蒸發導致失敗。邊緣孔最容易蒸發。

3、檢查384孔板質量：

（1）推薦使用Applied Biosystems（賽默飛）或同類優質384孔板，確保底部薄且平整。

（2）板子變形或不平會導致部分孔與加熱塊接觸不良。

二、分析無擴增孔的分布規律

在實驗記錄紙上標記384孔板的陽性/陰性分布圖：

1、邊緣孔（第一/最后一行或列）無擴增 → 極可能是熱蓋壓力不均或邊緣蒸發。解決方法：使用帶墊片的384孔板或在板四周加無菌水填充空余孔（平衡壓力），或更換專用384孔熱蓋墊。

2、連續多列或整行無擴增 → 可能對應加熱模塊的某條控溫通道故障，或該區域有污染物/氣泡。

3、隨機散在分布 → 多為加樣錯誤、試劑混合不均、或個別孔封膜破損。

三、儀器硬件與溫度均勻性驗證

VeritiPro的384孔模塊實際由多個半導體片組成，可能出現局部溫度偏差。

1、運行溫度驗證實驗（使用熒光染料）：

（1）配制含ROX或FAM染料（無淬滅）的PCR預混液，分裝至所有孔。

（2）運行標準PCR程序（例如95°C變性，60°C延伸，不設循環）。在60°C階段采集熒光圖像。

（3）正常情況所有孔熒光值應一致。若某區域熒光明顯偏低，說明該區域溫度異常（溫度過高導致染料淬滅或揮發？實際更可靠的是使用溫度探針板，但用戶通常沒有）。

2、梯度功能的影響：

若程序設置了梯度，確認無擴增孔是否落在梯度的高溫或低溫區域。重新計算梯度范圍內有效退火溫度，必要時縮小梯度跨度。

3、檢查加熱模塊表面：

關閉儀器，打開熱蓋，用無塵布蘸取70%乙醇輕輕擦拭384孔模塊表面，去除干涸的試劑或灰塵（殘留物會阻礙熱傳導）。

四、運行儀器自檢與校準

VeritiPro內置自檢程序：

1、進入儀器主界面 → Settings → Service（可能需要密碼，默認為1234或聯系技術支持） → 運行 Block Diagnostic 或 Temperature Verification。

2、查看是否有錯誤代碼或溫度超差報警。

3、執行“熱蓋壓力校準"（如果儀器提供該選項）：部分VeritiPro可調整熱蓋下壓行程，確保384孔板所有位置受力均勻。

五、耗材與方案替代測試

1、更換耗材品牌：嘗試使用另一盒新的384孔板（不同批次），避免板底厚度不均。

2、縮小反應體積：若當前用20μL，可嘗試10μL，減少蒸發風險并改善熱傳導。

3、運行對照實驗：

取同一混合反應液，分裝到96孔板（用普通PCR儀）和384孔板（用VeritiPro）。若96孔板全部正常，而384孔板仍有部分無擴增，則問題在于384孔板或儀器384孔模塊。

六、緊急處理建議（維持實驗進行）

1、避開故障區域：若確認某幾列/行始終失敗，設計實驗時只使用正常區域（如只使用中間60列），但會損失通量。

2、使用熱蓋壓力墊片：從賽默飛購買384孔板專用的熱蓋適配墊，能改善邊緣孔壓力。

3、改用96孔模塊（若VeritiPro支持模塊更換）：臨時更換為96孔模塊完成實驗。

4、先排除蒸發和封膜問題。對于384孔板，邊緣孔無擴增在超過80%的案例中是由于熱蓋壓力不足或封膜不嚴導致的蒸發。請在熱蓋上額外放置一塊平整的硅膠墊或使用帶邊框的384孔板，往往能直接解決問題。

賽默飛veritipro384孔梯度PCR儀部分孔無擴增

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