比色皿或樣品池污染,是導(dǎo)致NanoDrop One測量結(jié)果異常(如數(shù)據(jù)偏差大、重復(fù)性差或出現(xiàn)負值)常見的原因之一,大約80%的問題都與此有關(guān)。
NanoDrop One主要有兩種測量模式:基座(Pedestal)模式(常用)和比色皿(Cuvette)模式(用于稀釋樣品或動力學(xué)研究)。污染的原因和解決方案會有所不同。
一、基座模式(Pedestal)污染
這是絕大多數(shù)問題的根源,通常是由于上一次測量的樣品殘留導(dǎo)致。
1、如何判斷基座是否污染?
(1)用無塵擦鏡紙(如Kimwipes)和去離子水清潔上下基座并擦干。
(2)在基座上滴加 1-2 μL 去離子水。
(3)放下檢測臂,在軟件中選擇 “Blank"。
(4)讀取結(jié)果。如果 A260 或 A280 的吸光度值 > 0.04A,則說明基座存在污染。
2、如何清潔基座?
清潔時請遵循由弱到強的原則,并務(wù)必使用無塵擦鏡紙,普通紙巾會劃傷光學(xué)表面。
(1)常規(guī)清潔(每日/每次測量后):這是最基本、最重要的步驟。用無塵紙蘸取少量去離子水,輕輕擦拭上下兩個光學(xué)基座,然后擦干。每次測量前后都應(yīng)執(zhí)行此操作。
(2)深度清潔(針對頑固污漬):如果常規(guī)清潔無效,可以嘗試以下方法,操作后必須立即用大量去離子水沖洗并擦干。
去除蛋白質(zhì)或高鹽殘留:可使用 70% 乙醇 或 0.5M 稀鹽酸 (HCl) 擦拭。
去除頑固污染物:可使用 0.5% 次氯酸鈉溶液(即稀釋10倍的商業(yè)漂白水)擦拭。
推薦的深度去污:滴加 3 μL 0.5M HCl 在下基座,放下檢測臂等待 2-3分鐘,然后清潔擦拭。或用 3-5 μL 0.5% 次氯酸鈉 等待 30-60秒。
3、基座清潔
(1)禁止使用HF:它會損壞石英光纖。
(2)禁止在儀器上或附近使用噴壺或噴霧瓶:液體可能滲入儀器內(nèi)部造成損壞。
(3)避免液體長時間浸泡:不要讓鹽酸、酒精、漂白劑等溶劑在基座密封圈上停留超過1分鐘,以免密封圈松動。
(4)禁止觸摸或嘗試移除基座周圍的隔膜:它是固定的。
二、比色皿模式(Cuvette)污染
如果你的NanoDrop One/C配備了比色皿模塊,并且在使用比色皿時遇到問題:
1、污染表現(xiàn):結(jié)果不準確、出現(xiàn)異常峰或雜散光
2、清潔方法:
(1)每次測量后,立即用合適的溶劑(如蒸餾水)沖洗比色皿。頑固污漬可用稀鹽酸或乙醇浸泡,但避免刮傷透光面。
(2)用柔軟的紙或布自上而下擦拭比色皿的透光面,直至無殘留。
(3)確保比色皿清潔且干燥后再使用。
3、預(yù)防措施:
(1)使用無劃痕的比色皿,并避免手指接觸透光面(指紋會影響結(jié)果)。
(2)可用壓縮空氣吹掉比色皿架上的灰塵。
(3)及時清理比色皿架內(nèi)的任何濺出液體。
(4)不使用時保持儀器檢測臂關(guān)閉。
(5)確保使用的比色皿與儀器兼容(通常是10mm標準光徑)。
三、預(yù)防與實踐
1、日常習慣:將“清潔基座"變成肌肉記憶,每次測量前后都執(zhí)行。
2、溶劑一致性:務(wù)必使用與溶解樣品一致的緩沖液進行空白校正。
3、善用智能功能:NanoDrop One的Acclaro? 技術(shù)能幫你智能識別樣品中的污染物(如蛋白質(zhì)、苯酚等),善用這個功能可以幫你判斷問題是來自基座污染還是樣品本身。
4、定期性能驗證:建議每6個月使用性能驗證試劑盒(PV-1) 對儀器進行一次校準驗證。