原代肝細胞分離方法與膠原酶選擇指南【Nordmark】

在生命科學研究和藥物開發領域，高質量的原代肝細胞是研究肝臟生理功能、藥物代謝和毒性評估的重要工具。體外培養肝細胞的核心挑戰在于如何獲得形態結構完整且保持高代謝活性的肝細胞。而膠原酶作為從肝臟組織中分離原代細胞的關鍵酶制劑，其選擇直接影響細胞的產量、活性和功能完整性。

一、原代肝細胞分離的應用意義

原代肝細胞保留了體內肝臟的大部分特性，能夠準確反映藥物代謝、毒性反應和疾病機制，因此在以下領域具有不可替代的價值：

•  藥物代謝和毒性研究

•  肝病發病機制研究

•  生物人工肝支持系統開發

•  肝細胞移植治療

•  肝臟再生醫學研究

二、不同肝細胞分離方法的比較

以下小編簡要匯總了部分常用的肝臟細胞提取的方法，并對以下方法的優勢和不足之處進行對比。

以下以大鼠肝臟為例向大家簡要介紹肝臟細胞提取流程及選擇合適的膠原酶產品。一般情況下采用膠原酶灌注法來分離大鼠肝細胞。簡要步驟如下：

1、提前對灌洗液進行預熱；

2、將小鼠麻醉，打開腹腔、暴露肝臟，包括門靜脈（PV）和下腔靜脈（IVC）；

3、在PV和IVC下方放置外科線，穿刺PV后結扎固定；

4、往PV內以4ml/min注入Hanks液(小鼠為例)后剪斷IVC，期間可夾閉或打開IVC有助于血液排除；

5、至少灌洗5min，直至肝臟變色；

6、往PV內輸注Hanks液+膠原酶（推薦使用Nordmark Collagenase NB7D/NB8）混合液以4ml/min的速度持續消化(以大鼠為例，動物體型越大，流速越快、膠原蛋白酶濃度越高)；

7、完成消化后去除膽囊和肝包膜，將肝臟實質部分放置在容器中并用2~8℃預冷的Hanks液浸泡，轉移至生物安全柜進行后續處理。

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•  嚴格質控：每批次提供詳細的活性檢測報告，確保實驗可重復性

•  低內毒素：減少對細胞的非特異性刺激

•  穩定供應：*的生產體系保障產品批次間一致性

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