輕松構建3D肝球體：LifeNet培養方案，讓體外肝臟研究實現提效

一、引言

在肝臟疾病機制探索、藥物代謝評估與再生醫學研究領域，3D肝球模型因能復刻體內肝細胞的空間結構與細胞間交互作用，成為突破傳統2D培養局限的關鍵工具。然而，科研人員常面臨“肝球形成不均、功能維持短、操作流程復雜"等難題——從細胞復蘇到球體培養，任何一個環節的細微偏差，都可能導致實驗數據不可重復，甚至影響研究結論的可靠性。

LifeNet Health基于40多年人原代肝細胞研究經驗，近期推出經驗證合格可形成3D肝球細胞批次，及配套培養肝球實驗方案，搭配培養基與耗材體系，將復雜的3D培養流程轉化為“可復制、高穩定、長功能"的實驗操作。讓科研人員無需反復調試，即可獲得形態均一、功能穩定的3D肝球，為肝臟研究提供更貼近體內生理狀態的體外模型。

二、3步搞定3D肝球培養，告別繁瑣調試

傳統3D肝球培養的核心痛點，在于缺乏統一的操作規范——不同實驗室的復蘇溫度、接種密度、換液頻率差異，導致肝球大小不一、功能衰減速度不同。LifeNet Health的方案從“培養基制備-細胞復蘇-接種培養-換液維護"全流程入手，通過控制每一個關鍵參數，確保肝球培養結果的一致性。

圖1. 人原代肝細胞球體形成

1、培養基制備：預混配方

• 鋪板培養基（HHPM）：需添加15 mL專用補充劑（HHPMS）至250 mL基礎培養基，可按需加入青霉素/鏈霉素，經70%酒精消毒后在生物安全柜（BSC）內配制，避免污染；

• 維持培養基（HHCM）：500 mL基礎培養基搭配5 mL補充劑（HHCMS），配制后經0.2 μm濾膜過濾滅菌，確保無微生物干擾；

• 復蘇培養基（HHTM）：使用前需倒置混勻并過濾，37℃水浴預熱20-30分鐘，為細胞復蘇提供合適的滲透壓與溫度環境。這種“預混補充劑+嚴格無菌操作"的操作設計，省去科研人員自行配比的繁瑣，避免因成分濃度偏差導致的肝球功能異常。

2、細胞復蘇與接種

人原代肝細胞對復蘇過程較為敏感，溫度驟變或劇烈操作易導致細胞破裂、細胞活力下降。復蘇分為“分步控溫"與“溫和復蘇"步驟：

• 凍存管轉運：從液氮罐取出的凍存管，需先放入盛有液氮的便攜容器中，避免運輸過程中溫度回升；

• 水浴解凍：37℃水浴中垂直放置凍存管，僅讓細胞懸液部分浸入水中，90秒內完成解凍，且需倒置檢查懸液流動性——若未液化，僅追加5秒水浴，避免過度解凍損傷細胞；

• 接種密度：推薦15,000 cells/mL或30,000 cells/mL兩種密度，對應每孔1,500 cells或3,000 cells，可使用多通道移液器分注100μL細胞懸液，確保每孔細胞數量一致。按照該流程操作，LifeNet Health原代肝細胞的復蘇存活率穩定在80%以上，并形成直徑150-200 μm的均一肝球，無過大或過小球體，且球體邊緣光滑、內部細胞緊密，符合3D肝球的理想形態。

3、培養與維護：半量換液，定期維護

3D肝球的長期培養，關鍵在于平衡營養供給與代謝廢物清除。設計“半量換液"方案：

• 頭次換液：接種后前5天靜置培養，讓細胞自然形成球體，避免早期換液破壞聚集狀態。第5天用預熱的HHCM更換50μL培養基（僅更換一半體積），避免劇烈操作打散球體；

• 后續維護：每兩天（周一、三、五）半量換液一次，推薦成球培養時間為21天，確保肝球始終處于穩定的營養環境中。這種換液方式既能保證營養供給，又不干擾肝球結構，無需頻繁監控，可節省實驗時間投入。

圖2. 肝球體形成的圖像

A. 單個聚集體正在形成，但無法聚結為單個球體。

B. 聚集體正在形成，但邊緣不光滑。類球體顏色較深。

C-D. 良好、致密、半透明的類球體，邊緣清晰可辨。

三、配套產品支持，成球質量更有保障

優質3D肝球的形成，離不開適配的產品支撐。LifeNet Health為方案搭配“細胞+培養基+耗材"專屬組合，相關組件經協同驗證，避免因產品不兼容導致實驗失敗：

• 原代肝細胞：凍存細胞復蘇活性高，具備出色的聚集成球能力，無需額外馴化即可直接使用；

• 全流程培養基：從復蘇、鋪板到維持，每款培養基均針對3D培養優化，含肝細胞所需的生長因子，助力肝球功能穩定；

• 使用耗材：推薦的低吸附U型底96孔板，能有效引導細胞聚集，減少貼壁干擾，保障肝球形態均一。

圖3. 人原代肝細胞與原代肝細胞復蘇培養基

四、適配多場景研究，解鎖肝臟研究新可能

3D肝球成球模型，可應用于各類肝臟研究場景：

• 肝疾病機制研究：用疾病供體肝細胞構建3D肝球，復刻體內病理狀態，助力解析NASH、肝纖維化等疾病發展過程；

• 藥物代謝與毒性評估：可模擬藥物長期暴露效應，評估藥物代謝規律與潛在肝毒性；

• 毒理學：評估環境與食品污染物對肝臟的毒性。

五、總結

LifeNet Health憑借成熟經驗，提供詳細實驗操作流程，并搭配“細胞+培養基+耗材"的配套產品，通過三步便捷培養流程，可保障肝球形態均一、功能穩定，能適配多種研究場景。該方案可幫助科研人員減少反復試錯環節，將精力聚焦于核心研究，為肝臟疾病機制探索、藥物代謝評估及再生醫學研究提供有效可靠的模型支持，助力肝臟研究。

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