中瑞祥薄層成像掃描儀標準操作流程工作原理
是基于?薄層色譜分離技術?,利用?特定波長光源照射斑點?并通過?光電檢測器采集反射/熒光信號?,經?Kubelka-Munk 校正與積分計算?實現原位定性與定量分析的光密度工作站 。??
工作原理
?分離基礎?:依托薄層色譜法(TLC),樣品組分在固定相(吸附劑)與流動相(展開劑)間分配差異實現空間分離,形成獨立斑點 。
?光學檢測?:光源(氘燈/鹵鎢燈/汞燈)發射單色光(紫外 254/365nm 或可見光)照射斑點,物質吸收特征光或受激產生熒光,剩余光經?反射或透射?由 CCD/PMT 檢測器接收 。
?信號轉換?:光信號轉為電信號,通過?積分計算峰面積?,利用?Kubelka-Munk 理論?校正薄層散射導致的非線性吸光度,建立濃度 - 信號線性關系 。
?抗干擾機制?:采用?雙波長掃描?(扣除背景)和?鋸齒掃描?(補償板厚不均/斑點不規則),將誤差控制在 3% 以內 。??
標準操作流程
?前處理?:薄層板活化(烘干去濕)→ 樣品溶解點樣(直徑 1-2mm)→ 展開缸飽和后展開 → 干燥及顯色定位(如需)。
?儀器設置?:開機預熱光源 → 選擇檢測模式(吸收/熒光/猝滅)→ 設定波長(單/雙波長)→ 劃定掃描區域與分辨率(20-200μm/像素)。
?掃描采集?:置入薄層板 → 啟動線性或鋸齒軌跡掃描 → 實時采集光密度或熒光強度數據生成色譜圖/圖像 。
?數據處理?:軟件自動基線校正 → 識別斑點計算?Rf 值?與?峰面積? → 結合標準曲線(外標/內標法)輸出定量結果 。??
關鍵檢測模式
?吸收法?:測光吸收度,需散射校正,適用于多數顯色斑點。
?熒光法?:測激發熒光強度,靈敏度比吸收法高 1-3 個數量級,適用于微量或自身熒光物質。
?熒光猝滅法?:測背景熒光減弱程度,間接定量非熒光物質 。??