
細胞基本屬性
細胞名稱:UMNSAH/DF-1(雞胚成纖維細胞)
細胞別稱:UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1; UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1
細胞類型:成纖維細胞
生長特性:貼壁
培養條件:DMEM+10% FBS+1% P/S
培養環境:空氣,95%;二氧化碳 (CO2),5%
細胞簡介:UMNSAH/DF-1細胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞成纖維細胞株,自發永生化。分離的原代雞胚成纖維細胞在培養液中培養,傳代直到衰老,在培養過程中保持細胞在30%到60%密度,不衰老的克隆進行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖,說明UMNSAH/DF-1細胞是永生化而沒有轉化。UMNSAH/DF-1細胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達和重組病毒生產的基質。

客戶養的UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細胞,現在是第5次傳代,這次是1:3傳代,用的是上圖胰酶1毫升,消化2一3分鐘,反饋是此次傳代的第2天很多細胞不貼壁,幫忙看一下。
小尚解答
消化時間太長了,該細胞消化時間短,注意控制消化時間及吹打力度。細胞消化至變圓可以輕松吹下時即可終止消化,不能消化至漂浮。對于消化這步,客戶如果對該細胞經驗不多,無法準確掌控胰酶作用時間,建議客戶按照下述操作:
胰酶首先復溫到室溫后加入細胞,放入37度培養箱,然后每隔30秒,即吹打下細胞(此時吹打細胞應盡量輕柔,不能強行將細胞吹下,否則細胞可能出現機械損傷),如果能夠吹打散細胞,說明細胞消化完成可以終止消化,如果30秒吹打不下,再等30秒重復操作。消化完成后加3-4ML培養基終止消化,混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。傳代24h后可以觀察細胞,若死亡細胞及碎片較多建議PBS潤洗下貼壁的細胞,再加新的培養基繼續培養。
2.目前細胞活力較差,死細胞偏多,建議靜置培養一天看一下,若明天細胞仍然不貼壁就不建議繼續培養了。若有保種的凍存細胞可以重新復蘇培養。
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