Section.01 什么是Fc受體?
Fc受體是免疫細胞(巨噬細胞、單核細胞、粒細胞、NK細胞等除T細胞外幾乎所有的免疫細胞)表面的一類重要的跨膜受體,它的核心功能是識別和結合抗體的Fc段。
任何抗體(IgG、IgM等)的結構都像是一個"Y"字形:
Fab段 Y字的兩個"手臂",負責特異性識別并結合抗原,是抗體特異性的主要功能區域。
Fc段 Y字的"柄",不負責識別抗原,但負責與免疫細胞表面的Fc受體結合或者激活補體。
簡單來說,Fc受體可以天然地結合抗體的Fc段,形成的復合物并不是流式抗體中目標抗原-流式抗體的復合物,而是Fc受體-流式抗體的復合物。

Section.02 為什么要封閉Fc受體?
如果在檢測表達Fc受體的免疫細胞時,未經封閉,Fc受體會結合流式抗體的Fc段,導致細胞被標記并被檢測呈陽性——而這并非目的抗原和流式抗體特異性結合產生的陽性,從而產生大量假陽性,導致檢測結果失去參考意義。
因此,在表達Fc受體的免疫細胞流式實驗時,需要對其進行Fc受體封閉,使之無法結合流式抗體,從而保證檢出的陽性可靠。
封閉過程:加入足夠量的無關抗體,先讓Fc受體結合這些無關抗體,再加流式抗體后就不會被Fc受體結合,流式抗體只能和目的抗原結合,從而實現檢測目的、保證陽性可靠。

Section.03 怎么封閉Fc受體?
目前國內外有多個廠家的Fc封閉產品,例如Fc block™ Reagent、TruStain FcX™ 和 Fc Receptor Binding Inhibitor 等,主要通過特異性結合并阻斷CD16(FcγR III)、CD32(FcγR II)和CD64(FcγR I)等受體的表位,防止后續流式抗體的Fc段發生非特異性結合。
尚恩生物也推出了相應的Fc封閉試劑:
SNAB-001 Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody (2.4G2) — 用于小鼠樣本的Fc封閉
SNAB-002 Purified Anti-Human CD16 Antibody (3G8) — 用于人樣本的Fc封閉

Section.04 封閉注意事項
1. Fc受體封閉應在細胞處理完成后、孵育流式抗體之前進行,以達到最佳封閉效果。
2. 牛血清白蛋白(BSA)或胎牛血清(FBS)不能封閉Fc受體,它們只能封閉非特異性蛋白結合位點(疏水作用),無法阻斷抗體Fc段與Fc受體的特異性結合。
3. 同型對照的抗體或同種屬的血清雖然理論上能起到封閉Fc受體的作用,但由于特異性不足、樣本差異等,其效果遠不如采用針對Fc受體的特異性抗體。
4. 實際實驗中建議設置"無封閉對照"(No Fc block)和"有封閉對照",比較兩者的熒光強度差異,以確定封閉的必要性和效果。
5. Fc封閉不能代替同型對照實驗,同型對照組也是需要正常進行的。
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