二硫吡啶-生物素(常見型號為Biotin-HPDP,CAS號129179-83-5)是一種巰基反應性生物素化試劑,分子結構包含三部分:
生物素基團:與鏈霉親和素/親和素強特異性結合
長鏈連接器:減少空間位阻
吡啶二硫醇末端:與巰基共價結合
物理性質:
外觀:淡黃色至橙色固體粉末
溶解性:易溶于DMSO、DMF等有機溶劑,水中溶解度有限
儲存:-20℃避光干燥保存,避免反復凍融
結構式:
巰基特異性反應
在pH7-8的緩沖液中,吡啶二硫醇基團可與蛋白質/小分子中的游離巰基快速反應
形成可逆的二硫鍵連接,反應過程釋放的2-吡啶硫醇可通過343nm特征吸收監測
可逆性設計
結合的二硫鍵可被DTT、TCEP等還原劑溫和斷裂
實現目標分子的回收與再利用
親和富集能力
生物素-鏈霉親和素結合常數達101? M?1,結合力較強
可在復雜樣本中特異性捕獲低豐度巰基蛋白
蛋白質巰基標記
特異性標記蛋白質半胱氨酸殘基
用于后續的親和純化、熒光檢測或質譜分析
蛋白質相互作用研究
制備生物素化探針,通過拉下實驗(Pull-down)篩選互作蛋白
結合質譜技術分析蛋白質復合物組成
細胞表面蛋白分析
標記細胞膜上的巰基化蛋白
用于免疫熒光成像、流式細胞分析
藥物研發
抗體-藥物偶聯物(ADC)的制備
靶點蛋白的選擇性標記與功能研究
溶劑選擇:需先溶于DMSO或DMF,再加入水性反應體系
反應條件:pH7-8的緩沖環境最適宜,避免強酸強堿
還原劑兼容性:標記后樣品避免接觸還原劑,防止二硫鍵斷裂
實驗設計:根據目標蛋白特性選擇合適的反應時間與試劑濃度
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