干細(xì)胞培養(yǎng) 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基是如何由Gibco Essential 8培養(yǎng)基的原始配方調(diào)整而來(lái)，以適應(yīng)用戶(hù)更為靈活的培養(yǎng)時(shí)間安排？ 

成份明確的Gibco Essential 8原始培養(yǎng)基配方經(jīng)專(zhuān)門(mén)優(yōu)化，能夠延長(zhǎng)PSC培養(yǎng)時(shí)兩次換液的間隔時(shí)間。 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的產(chǎn)品設(shè)定與Gibco Essential 8 原始培養(yǎng)基有所不同么？ 

不是的，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基與Gibco Essential 8 培養(yǎng)基的產(chǎn)品設(shè)定是相同的；也是基礎(chǔ)培養(yǎng)基與凍存的50X添加劑一并提供。 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基如何實(shí)現(xiàn)無(wú)需每日換液？ 

GibcoTM Essential 8 Flex培養(yǎng)基是在Gibco Essential 8原始培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上通過(guò)配方調(diào)整而得來(lái)，延長(zhǎng)了PSC培養(yǎng)基中關(guān)鍵熱敏成份（包括FGF2）的活性。 

使用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基時(shí)，我每周幾天無(wú)需換液？ 

您最多可連續(xù)兩天不換液（如周六周日），每周最多三天不換液。 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的換液時(shí)間安排有多靈活？你們能例舉出一份換液時(shí)間表嗎？ 

在每周兩次傳代細(xì)胞的頻率下可觀察到最佳結(jié)果。此處以一份無(wú)需周末換液的培養(yǎng)時(shí)間表為例，用戶(hù)可在周一和周四分種細(xì)胞，并在傳代后24小時(shí)左右——即周二和周五進(jìn)行一次培養(yǎng)基的更換。在該例中，周五換液添加的培養(yǎng)基應(yīng)是標(biāo)準(zhǔn)體積的兩倍。 ? 

我應(yīng)何時(shí)開(kāi)始使用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基進(jìn)行換液？ 

在每周初換用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基可觀察到最佳效果，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基常規(guī)用于已建立好的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)系統(tǒng)。 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基與其他無(wú)需周末換液的PSC培養(yǎng)溶液有何區(qū)別？ 

不同于其他免除了周末換液操作的市售商品化PSC培養(yǎng)液，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基不需要為了避免換液而調(diào)節(jié)傳代細(xì)胞的比例。有了Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基，您就可維持一周兩次的分種安排并省去周末的換液操作了。 ? 

你們?nèi)酝扑]使用Gibco玻連蛋白作為Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的包被基質(zhì)么？ 

Gibco 玻連蛋白（VTN-N）-截短型重組人源蛋白（Gibco Vitronectin (VTN-N) Recombinant Human Protein, Truncated，貨號(hào) A14700）與Gibco Geltrex 無(wú)LDEV，經(jīng)hESC驗(yàn)證的低生長(zhǎng)因子基底膜基質(zhì)（Gibco Geltrex LDEV-Free, hESC Qualified Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix，貨號(hào)A1413301或A1413302）兩者均適用于Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基。 ? 

Gibco 乙二胺四乙酸溶液是有效兼容Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的推薦解離試劑么？ 

Gibco 乙二胺四乙酸溶液（Gibco Versene Solution，貨號(hào) 15040066）與酶解離法均適用于傳代操作。 

測(cè)試過(guò)哪些解離試劑與Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基兼容？ 

Gibco 乙二胺四乙酸溶液（貨號(hào) 15040066），Gibco TrypLE Select酶（Gibco TrypLE Select Enzyme，貨號(hào) 12563011）與Gibco StemPro Accutase細(xì)胞解離試劑（貨號(hào) A1110501）均能兼容Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基。 

在Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，我是否需要在傳代過(guò)程中加入ROCK抑制劑？ 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基與其他許多PSC培養(yǎng)基一樣，在使用乙二胺四乙酸溶液成集落傳代PSC細(xì)胞時(shí)，無(wú)需加入ROCK抑制劑。如果進(jìn)行單細(xì)胞傳代，我們則推薦添加Gibco RevitaCell添加劑（貨號(hào) A2644501）或其他ROCK抑制劑。 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的推薦傳代比例是多少？ 

傳代比例需基于您所使用的細(xì)胞系來(lái)確定。Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基通常能夠良好兼容1:3至1:12的分種比例。 

使用Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基進(jìn)行換液和傳代的時(shí)間應(yīng)怎樣安排？ 

我們?cè)诿恐軆纱蝹鞔?xì)胞，鋪板24小時(shí)左右進(jìn)行換液的條件下觀察到了結(jié)果。周一和周四進(jìn)行傳代，周二和周五（雙倍培養(yǎng)基體積）換液結(jié)果最佳。 

若嘗試從Gibco Essential 8原始培養(yǎng)基切換至Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基，在配制培養(yǎng)基的方法上有什么不同？ 

Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的配制方法與Gibco Essential 8 原始培養(yǎng)基相同。差別在于換液的時(shí)間安排，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基所需的換液間隔時(shí)間更為靈活，可維持連續(xù)兩天無(wú)需換液。   

我可以在Gibco Essential 8基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入Gibco Essential 8 Flex添加劑么？ 

不可以，Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基是一個(gè)完整的試劑盒，其中基礎(chǔ)培養(yǎng)基與凍存添加劑需配套使用。Gibco Essential 8 Flex培養(yǎng)基的組份不應(yīng)與Gibco Essential 8培養(yǎng)基的組份混合。 

我能在37°C水浴中化凍Gibco Essential 8 Flex添加劑么？ 

不可以，GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑不宜在37°C水浴中化凍。在室溫條件下化凍1小時(shí)左右可獲得最佳結(jié)果。您也可在2–8°C條件下過(guò)夜化凍GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑，這樣的操作可能會(huì)產(chǎn)生少量沉淀物。沉淀物的存在不會(huì)對(duì)培養(yǎng)基使用效果產(chǎn)生負(fù)面影響。 

在GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑的化凍過(guò)程中，我觀察到一些沉淀，我該怎么辦？ 

GibcoTM Essential 8TM Flex添加劑中出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象是比較少見(jiàn)的；不過(guò)，即使發(fā)現(xiàn)有沉淀，也不會(huì)影響培養(yǎng)基的使用效果。如果您在添加劑中觀察到沉淀，請(qǐng)充分混勻后按常規(guī)操作將其加入GibcoTM Essential 8TM Flex基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。   

加入添加劑后的GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基保質(zhì)期有多久？ 

為達(dá)到最佳效果，加入添加劑后的GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基建議兩周內(nèi)用完。 

日常使用時(shí)，我能在37°C水浴中溫育GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？ 

不可以，請(qǐng)勿在37°C條件下溫育GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基。

我能否在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中使用ROCK抑制劑？ 

可以，GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中可添加ROCK抑制劑。我們推薦您使用GibcoTM RevitaCellTM添加劑（貨號(hào) A2644501），該產(chǎn)品專(zhuān)為減少應(yīng)激對(duì)PSC的影響而設(shè)計(jì)。 

我能否使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基進(jìn)行單細(xì)胞傳代？ 

可以，GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基能夠兼容單細(xì)胞傳代操作。當(dāng)您進(jìn)行單細(xì)胞傳代時(shí)，請(qǐng)確保使用了GibcoTM RevitaCellTM添加劑（貨號(hào) A2644501）或一些其他種類(lèi)的ROCK抑制劑。 

在使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基的條件下，我能否頻繁調(diào)整換液時(shí)間表？ 

請(qǐng)選擇并保持規(guī)律的傳代和換液操作時(shí)間以得到的結(jié)果。舉例來(lái)說(shuō)，如果您希望周末不換液，您可在周一/周四分種細(xì)胞，周二/周五進(jìn)行換液。 

我能否對(duì)培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中的細(xì)胞進(jìn)行凍存？ 

可以，在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)的細(xì)胞可進(jìn)行凍存和復(fù)蘇，相關(guān)操作與使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基一致。 

我目前正在使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基，我能方便地切換至GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？我能僅在周末離開(kāi)時(shí)使用這款培養(yǎng)基么？ 

持續(xù)使用同款培養(yǎng)基培養(yǎng)您的PSC細(xì)胞將獲得最佳結(jié)果。從GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基切換至GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基是一個(gè)十分簡(jiǎn)單的操作過(guò)程，您只需在一周開(kāi)始時(shí)將細(xì)胞接種到GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中即可，在進(jìn)入兩天不換液的間隔期之前，最好對(duì)細(xì)胞進(jìn)行一次傳代操作。 

我正在使用一款現(xiàn)有的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基，不過(guò)希望能免去周末的換液操作。我能僅在周末換用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？ 

由于持續(xù)使用單一的PSC培養(yǎng)基能夠幫助獲得最佳的培養(yǎng)效果，我們不推薦頻繁地將細(xì)胞從一種培養(yǎng)基直接切換至另一種。持續(xù)使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基能夠獲得最佳結(jié)果。 

GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基與緩釋FGF2添加劑之間的區(qū)別是什么？ 

StemBeadsTM FGF2添加劑一類(lèi)的緩釋產(chǎn)品能夠向生長(zhǎng)培養(yǎng)基中釋放FGF2，從而補(bǔ)充隨時(shí)間而逐漸丟失的FGF2活性，而GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基則能夠避免FGF2的活性喪失。 

StemBeadsTM FGF2添加劑的工作流程與GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基的相比有何異同？ 

不同于StemBeadsTM FGF2添加劑，GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基無(wú)需任何額外添加或優(yōu)化操作，即可有效限制FGF2的活性喪失。 

我的細(xì)胞適應(yīng)了GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基之后，穩(wěn)定的換液時(shí)間表和連續(xù)的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)會(huì)對(duì)這些細(xì)胞有何長(zhǎng)期影響？ 

我們?cè)谑÷悦刻鞊Q液的條件下，使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)多種細(xì)胞系多達(dá)50代，未發(fā)現(xiàn)明顯影響。多能性標(biāo)志物的表達(dá)（Tra-1-60，SSEA4，Sox2，Oct-4與Nanog），分化潛能與正常核型在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基長(zhǎng)期培養(yǎng)的條件下均得到保持。 

使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基時(shí)，我的細(xì)胞在兩天不換液間隔期中是否會(huì)累積廢物而產(chǎn)生不良效應(yīng)？ 

和任何PSC培養(yǎng)一樣，使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基可能會(huì)出現(xiàn)一些細(xì)胞碎片和pH值的下降情況。不過(guò)，我們未發(fā)現(xiàn)這些累積的廢物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)或多能性方面造成長(zhǎng)期的不良影響。 

在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞是否會(huì)對(duì)我的細(xì)胞的核型造成影響？ 

我們發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期培養(yǎng)長(zhǎng)達(dá)50代的多株PSC細(xì)胞系具有正常的核型。 

我能否將GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中長(zhǎng)期培養(yǎng)的PSC用于后續(xù)的分化操作？ 

我們將細(xì)胞培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中長(zhǎng)達(dá)15代，未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的后續(xù)分化潛能受到任何影響。進(jìn)行擬胚體分化和使用GibcoTM PSC神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基（貨號(hào)A1647801），GibcoTM PSC心肌細(xì)胞分化試劑盒（貨號(hào)A25042SA），GibcoTM PSC定形內(nèi)胚層誘導(dǎo)試劑盒（貨號(hào)A27654SA）等產(chǎn)品進(jìn)行分化均證明這些細(xì)胞擁有三系分化潛能。 

我是否會(huì)在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中培養(yǎng)的兩批細(xì)胞之間觀察到形態(tài)差異？ 

培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中的細(xì)胞能夠保持PSC的正常形態(tài)，如緊湊均一的細(xì)胞克隆，清晰邊界和高核質(zhì)比等特征。 

你們是否在GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)的PSC中觀察到多能標(biāo)志物表達(dá)的某些改變？ 

我們?cè)?/span>GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)多株PSC細(xì)胞系超過(guò)50代，未觀察到多能標(biāo)志物表達(dá)方面的顯著改變。 

你們確認(rèn)過(guò)GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基培養(yǎng)PSC的三系分化潛能么？ 

對(duì)于GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基中長(zhǎng)期培養(yǎng)的細(xì)胞，其分化為外胚層，內(nèi)胚層，中胚層譜系的潛力不受影響。這一結(jié)論是由擬胚體的自發(fā)分化實(shí)驗(yàn)和神經(jīng)干細(xì)胞，心肌細(xì)胞和定形內(nèi)胚層的定向分化實(shí)驗(yàn)確認(rèn)過(guò)的。 

我能在重編程研究中使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？ 

我們將本品的使用結(jié)果與GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配InvitrogenTM CytoTuneTM-iPS 2.0 仙臺(tái)病毒重編程試劑盒的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比較，未發(fā)現(xiàn)重編程效率方面受到明顯影響。我們推薦在克隆形成階段每天進(jìn)行換液（第7-28天）。 

我能在基因編輯的工作流程中使用GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基么？ 

我們目前尚未就基因編輯操作開(kāi)展GibcoTM Essential 8TM Flex培養(yǎng)基的測(cè)試。 

何為GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基？ 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基是一種不含異源成份，無(wú)需飼養(yǎng)層的培養(yǎng)基產(chǎn)品，專(zhuān)為人源多能干細(xì)胞（PSC）的生長(zhǎng)和增殖而配制。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基最初由James Thomson實(shí)驗(yàn)室的Chen等（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429）開(kāi)發(fā)，并通過(guò)Cellular Dynamics International驗(yàn)證；到目前為止已久經(jīng)測(cè)試，可維持多類(lèi)PSC細(xì)胞系的多能性。 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中有多少種成份？ 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基僅含培養(yǎng)PSC所需的八種必需成份。本品最初由Chen等（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429).研發(fā)，  目的是為了克服mTeSRTM培養(yǎng)基中所發(fā)現(xiàn)的變異度問(wèn)題。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中專(zhuān)門(mén)以不含白蛋白（BSA）的有限成份的設(shè)計(jì)減少變異度（參見(jiàn)下表）。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基為用戶(hù)準(zhǔn)備了方便的兩組分試劑盒：500 mL GibcoTM Essential 8TM基礎(chǔ)培養(yǎng)基與10 mL GibcoTM Essential 8TM添加劑（50X）。 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基含有bFGF么？ 

是的。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中含有100 ng/mL堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF），因此無(wú)需額外添加bFGF。 

何為GibcoTM 玻連蛋白（VTN-N）？ 

GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）是按照人源玻連蛋白62-478號(hào)氨基酸片段設(shè)計(jì)，在大腸桿菌中表達(dá)的截短型人源重組蛋白。VTN-N經(jīng)內(nèi)涵體純化和重新折疊，適合在人源PSC無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系作為基質(zhì)使用（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429）。當(dāng)與GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基聯(lián)用時(shí)，VTN-N經(jīng)驗(yàn)證能夠幫助維持多種PSC細(xì)胞系的多能性和正常生長(zhǎng)。 

GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）與其他基底膜抽提物相比有何特點(diǎn)？ 

由于VTN-N是成份明確的人源重組蛋白，因此相比人血漿來(lái)源的玻連蛋白和標(biāo)準(zhǔn)基底膜抽提物（BME）而言，能夠有助于降低PSC培養(yǎng)的變異度。此外，VTN-N與全長(zhǎng)的玻連蛋白及其他成份明確的基質(zhì)相比更加經(jīng)濟(jì)和便于縮放PSC培養(yǎng)體系。 

以GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）作為細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的條件相比使用其他無(wú)飼養(yǎng)層系統(tǒng)而言，有哪些主要的區(qū)別需加以考慮？ 

以GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）作為細(xì)胞生長(zhǎng)基質(zhì)使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的條件相比使用其他無(wú)飼養(yǎng)層系統(tǒng)而言，有三個(gè)主要差別需要加以考量： 

通常細(xì)胞的傳代時(shí)間比其他無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基提前24小時(shí)左右。 

細(xì)胞在達(dá)到85%左右的匯合度時(shí)即需要傳代。如果細(xì)胞傳代時(shí)超過(guò)了85%的匯合度，細(xì)胞健康度及最終的細(xì)胞得率都會(huì)下降。 

細(xì)胞應(yīng)使用EDTA進(jìn)行傳代。不推薦使用膠原酶或分散酶。   

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基是不含異源成份（僅人源或重組來(lái)源）的么？ 

是的。GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基不含異源成份，是僅有8種成份的培養(yǎng)基，能夠?yàn)槟峁┙】岛涂煽康呐囵B(yǎng)效果。 

GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）是不含異源成份（僅人源或重組來(lái)源）的么？ 

是的。VTN-N是成份明確的人重組蛋白。 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）能支持長(zhǎng)期培養(yǎng)多能干細(xì)胞（PSC）么？ 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與玻連蛋白經(jīng)證明能夠支持PSC的生長(zhǎng)達(dá)50代以上而不會(huì)發(fā)生任何核型異常，同時(shí)這些PSC仍保持著分化為三胚層的能力。James Thomson實(shí)驗(yàn)室Chen等報(bào)道（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429.），玻連蛋白的VTN-N變異體與GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基聯(lián)用時(shí)相比野生型玻連蛋白能更好地支持人多能干細(xì)胞的貼壁和存活。。 

不同批次的GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基之間會(huì)存在差異么？ 

相比現(xiàn)有其他種類(lèi)的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基，GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的變異度更小。不同于其他含有超過(guò)20種高度變異性成份的培養(yǎng)基，GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基在cGMP標(biāo)準(zhǔn)下生產(chǎn)，擁有配方和生長(zhǎng)因子水平，能夠以最小的變異度幫助用戶(hù)獲得最大的細(xì)胞健康度，多能性和生長(zhǎng)效果。 

之前培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基和基質(zhì)的多能干細(xì)胞（PSC）能換用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白進(jìn)行培養(yǎng)么？ 

培養(yǎng)于其它無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的細(xì)胞，例如mTeSRTM培養(yǎng)基搭配MatrigelTM基底膜基質(zhì)，或StemProTM hESC SFM搭配GeltrexTM基質(zhì)，也能夠成功培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配VTN-N的體系中。此外，在飼養(yǎng)層細(xì)胞搭配KnockOutTM SR中培養(yǎng)的PSC經(jīng)證明也能夠培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配VTN-N的組合中。不過(guò)在更換培養(yǎng)基體系之前，細(xì)胞必須手工傳代或用EDTA進(jìn)行傳代到GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基搭配VTN-N的體系中。 

之前凍存于其他培養(yǎng)條件的多能干細(xì)胞（PSC）能復(fù)蘇和后續(xù)培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合體系中么？ 

可以。在mTeSRTM培養(yǎng)基和BD MatrigelTM基底膜基質(zhì)條件下培養(yǎng)并凍存的PSC細(xì)胞可用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基復(fù)蘇，再種到VTN-N基質(zhì)包被的板上。某些細(xì)胞系使用凍存前的原生長(zhǎng)培養(yǎng)基及基質(zhì)進(jìn)行復(fù)蘇可能效果會(huì)更好。在隨后的傳代過(guò)程中，使用EDTA將這些細(xì)胞傳代至GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和VTN-N的培養(yǎng)體系中。 

在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基 和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的體系中培養(yǎng)的細(xì)胞外觀如何？ 

您預(yù)期可看到正常的多能干細(xì)胞（PSC）形態(tài)。PSC的預(yù)期生長(zhǎng)形態(tài)是如圖所示的典型形態(tài)為，包括邊界清晰的緊密聚集克隆和高核質(zhì)比。請(qǐng)參見(jiàn)下方第六次傳代時(shí)的PSC圖片。 

我應(yīng)如何配制GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基？ 

如需配置500 mL GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基，請(qǐng)將GibcoTM Essential 8TM添加劑（50X）室溫化凍1小時(shí)，之后于無(wú)菌條件下將下列成份混合在一起：

我能使用其他版本的DMEM/F-12替代試劑盒中所提供的GibcoTM Essential 8TM基礎(chǔ)培養(yǎng)基么？ 

在配制GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基時(shí)，不能使用其他貨號(hào)的DMEM/F-12替代GibcoTM Essential 8TM基礎(chǔ)培養(yǎng)基。試劑盒中提供的GibcoTM Essential 8TM基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有更高濃度的碳酸氫鈉。 

我能在37°C水浴中解凍GibcoTM Essential 8TM添加劑（50X）么？ 

最好在室溫化凍1小時(shí)來(lái)化凍此款添加劑。 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的保質(zhì)期有多久？ 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的保質(zhì)期為2–8°C條件下放置兩周。 

日常使用時(shí)，我能在37°C水浴中溫育GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基么？ 

非常重要的是，GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基需放置在室溫下進(jìn)行平衡，請(qǐng)勿在37°C水浴中平衡。bFGF活性會(huì)在從4°C至37°C的溫度反復(fù)改變中迅速降低。 

Rho相關(guān)蛋白激酶（ROCK）抑制劑適用于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基么？ 

是的。不過(guò)，該抑制劑并不是必需的，我們內(nèi)部不會(huì)日常使用這些抑制劑。如需使用Rho相關(guān)蛋白激酶（ROCK）抑制劑，您可只在傳代時(shí)的培養(yǎng)基中進(jìn)行添加。常規(guī)換液操作時(shí)不應(yīng)添加這類(lèi)抑制劑。請(qǐng)基于具體情況進(jìn)行添加，常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)需添加這些抑制劑。 

Rho相關(guān)蛋白激酶（ROCK）抑制劑或blebbistatin的作用是什么？ 

加入ROCK抑制劑（HA100或Y27632）或Blebbistatin能夠在初始期促進(jìn)細(xì)胞存活，并支持高的克隆形成效率，加入轉(zhuǎn)鐵蛋白和硒元素也能夠提高克隆形成效率。如果常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基中包含了這一類(lèi)ROCK抑制劑，那么可能就有必要在日常培養(yǎng)中持續(xù)加入抑制劑。 

在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，我能否采用比其他無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基更低的換液頻率？ 

不可以。除傳代的當(dāng)天之外，細(xì)胞都應(yīng)每天換液。 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合中推薦用怎樣的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代？ 

培養(yǎng)在GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基與VTN-N組合中的細(xì)胞應(yīng)使用EDTA進(jìn)行傳代。 

在使用GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，我能否使用分散酶和膠原酶等酶類(lèi)進(jìn)行傳代？ 

分散酶與膠原酶一類(lèi)的酶并不適用于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基和GibcoTM玻連蛋白（VTN-N）的組合。使用這些酶類(lèi)傳代會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力和貼壁能力下降。 

你們推薦使用何種EDTA濃度進(jìn)行傳代？ 

我們推薦您使用以不含鈣或鎂的Dulbecco氏磷酸緩沖鹽溶液（DPBS）制備的 0.5 mM EDTA溶液。（貨號(hào)14190-144（在歐洲，貨號(hào)為14190-094）） 

采用EDTA作為解離試劑時(shí)，理想的孵育時(shí)間是多久？ 

EDTA的理想孵育時(shí)間為37°C條件下4-5分鐘。當(dāng)細(xì)胞開(kāi)始分離變圓，顯微鏡下即可觀察到克隆中開(kāi)始出現(xiàn)空洞，這時(shí)它們已經(jīng)很容易從器皿上解離下來(lái)了（圖A，下方）。我們不推薦您讓細(xì)胞克隆過(guò)度分散，如下方圖B所示。 

圖A 

圖B 

我能否在室溫條件下使用EDTA孵育細(xì)胞？ 

可以，EDTA可在室溫下使用，不過(guò)孵育時(shí)間可能會(huì)略微延長(zhǎng)，時(shí)間約為5-8分鐘。 

推薦的傳代比例是多少？ 

由于EDTA具有不同于分散酶和膠原酶的解離屬性，解離下來(lái)的克隆尺寸（使用EDTA）會(huì)明顯小一些，因此應(yīng)對(duì)傳代比例進(jìn)行調(diào)整以獲得最佳的培養(yǎng)條件。細(xì)胞達(dá)到85%左右匯合度的時(shí)候即可傳代，通常為第四天。有時(shí)細(xì)胞在第三天即應(yīng)傳代。使用EDTA進(jìn)行傳代的典型比例是1:6,1:8或1:10。用戶(hù)應(yīng)對(duì)傳代比例進(jìn)行調(diào)整，從而確保細(xì)胞不要過(guò)早或過(guò)晚進(jìn)行傳代。 

在常規(guī)傳代過(guò)程中，可使用PBS潤(rùn)洗細(xì)胞么？ 

使用EDTA對(duì)人PSC進(jìn)行傳代的過(guò)程中，加入EDTA之前一定要使用不含鈣鎂的DPBS潤(rùn)洗細(xì)胞。 

細(xì)胞可凍存于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中么？ 

可以，細(xì)胞可常規(guī)凍存于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基+10% DMSO中。 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中的胰島素有何作用？ 

胰島素對(duì)于細(xì)胞的存活與增殖至關(guān)重要。 

L-抗壞血酸的作用是什么？ 

L-抗壞血酸（維生素C）能夠促進(jìn)人胚胎干細(xì)胞與iPSC的增殖和擴(kuò)增。 

硒元素的作用是什么 

硒對(duì)于維持培養(yǎng)條件是必需的。 

轉(zhuǎn)鐵蛋白的作用是什么？ 

加入轉(zhuǎn)鐵蛋白能夠提升初期細(xì)胞的存活并支持高的克隆形成效率。 

TGFβ的作用是什么？ 

加入TGFβ能夠增加NANOG的表達(dá)，并幫助維持人PSC培養(yǎng)的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。 

源自皮膚活檢樣本的成纖維細(xì)胞能否培養(yǎng)于GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中，以實(shí)現(xiàn)無(wú)異源成份的培養(yǎng)條件？ 

可以，源自皮膚活檢樣本的成纖維細(xì)胞可在添加有EGF，凝血酶和皮質(zhì)醇的GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中培養(yǎng)和增殖（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429.） 

為何即使在膠原酶IV的分離時(shí)間（37°C條件下30-60分鐘，實(shí)際效果視特定批次而定）比分散酶更長(zhǎng)的情況下，也最好使用IV型膠原酶而不是分散酶？ 

實(shí)際上，在基于飼養(yǎng)層的培養(yǎng)體系中，分散酶（2 mg/mL）需要37°C條件下進(jìn)行15-25分鐘的孵育。無(wú)飼養(yǎng)層的培養(yǎng)體系需2-3分鐘的解離時(shí)間。分散酶是一種更強(qiáng)烈的酶，所以起效更快，但也意味著當(dāng)收獲PSC細(xì)胞團(tuán)時(shí)，它們對(duì)后續(xù)的吹打更為敏感。在收獲細(xì)胞團(tuán)時(shí)，它們會(huì)被上下吸取數(shù)次，從而形成適當(dāng)大小的團(tuán)塊。如果應(yīng)用IV型膠原酶收獲細(xì)胞，則由于細(xì)胞團(tuán)更難分解，可施加更多次數(shù)的吹打，不過(guò)這也意味著細(xì)胞團(tuán)不至于被解離成非常小的團(tuán)塊。如果采用分散酶收獲細(xì)胞，它們需吹打的次數(shù)更少，用戶(hù)也需要多加小心，不要將細(xì)胞團(tuán)分散過(guò)度。兩種酶的使用效果均不錯(cuò)，如果您擁有足夠的經(jīng)驗(yàn)，您可能更喜歡使用分散酶節(jié)省操作時(shí)間。但對(duì)于經(jīng)驗(yàn)不足的用戶(hù)，我們推薦您使用IV型膠原酶，因?yàn)樗鼮榘踩^(guò)度吹打造成培養(yǎng)物損傷的可能性也更小。 

GibcoTM RevitaCellTM添加劑適用于任何種類(lèi)的PSC生長(zhǎng)培養(yǎng)基么？ 

我們測(cè)試和確認(rèn)了適用于下列PSC生長(zhǎng)培養(yǎng)基：GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基，GibcoTM StemProTM hESC SFM，mTesR1TM培養(yǎng)基和含有GibcoTM KnockOutTM血清替代物（KSR）的飼養(yǎng)層依賴(lài)的培養(yǎng)基。 

GibcoTM RevitaCellTM添加劑適用于哪些種類(lèi)的PSC？ 

我們僅在人源PSC上進(jìn)行了測(cè)試。 

GibcoTM RevitaCellTM添加劑適用于哪些種類(lèi)的原代細(xì)胞？ 

我們僅在下列人類(lèi)細(xì)胞（角膜上皮細(xì)胞，角質(zhì)形成細(xì)胞，外周血單核細(xì)胞）和大鼠皮層神經(jīng)元上進(jìn)行了測(cè)試。 

GibcoTM RevitaCellTM添加劑能應(yīng)用于飼養(yǎng)層上培養(yǎng)的iPSC么？還是僅推薦用于無(wú)飼養(yǎng)層的iPSC培養(yǎng)？ 

兩種應(yīng)用均通過(guò)了相關(guān)測(cè)試。 

在無(wú)飼養(yǎng)層的培養(yǎng)操作中，GibcoTM RevitaCellTM添加劑能夠兼容何種無(wú)飼養(yǎng)層的基質(zhì)？ 

GibcoTM RevitaCellTM添加劑經(jīng)測(cè)試能夠兼容GibcoTM GeltrexTM基質(zhì)，GibcoTM玻連蛋白，LN-521TM干細(xì)胞基質(zhì)和iMatrix-511。 

GibcoTM RevitaCellTM添加劑可否應(yīng)用于添加血清的培養(yǎng)基中，以培養(yǎng)原代細(xì)胞？ 

我們尚未測(cè)試此種應(yīng)用。 

GibcoTM RevitaCellTM添加劑能與傳統(tǒng)的ROCK抑制劑共用么？ 

不可以。GibcoTM RevitaCellTM添加劑與傳統(tǒng)的ROCK抑制劑聯(lián)用時(shí)會(huì)對(duì)PSC造成不良影響。 

細(xì)胞凍存前是否需要用GibcoTM RevitaCellTM添加劑預(yù)處理24小時(shí)？ 

不可以，這樣的預(yù)處理對(duì)細(xì)胞有害。 

電轉(zhuǎn)操作后，GibcoTM RevitaCellTM添加劑能否幫助細(xì)胞復(fù)原？ 

是的，這一應(yīng)用通過(guò)了iPSC測(cè)試。不過(guò)，原代細(xì)胞未進(jìn)行相關(guān)測(cè)試。 

何為PSC凍存試劑盒？ 

PSC凍存試劑盒包含了無(wú)異源成份的PSC凍存培養(yǎng)基——該產(chǎn)品是用于凍存早期傳代的多能干細(xì)胞（PSC）的即用型溶液，以及GibcoTM RevitacellTM添加劑（100X）——應(yīng)用于解凍后培養(yǎng)基的化學(xué)成份明確的復(fù)蘇添加劑。這些試劑組合使用時(shí)，有助于將細(xì)胞活力的喪失降至最小，使細(xì)胞復(fù)蘇后的恢復(fù)，并盡可能減少PSC不期望的分化情況發(fā)生。本試劑盒也可用于凍存和復(fù)蘇外周血單核細(xì)胞（PBMCs ），增強(qiáng)其復(fù)蘇后的細(xì)胞活力及恢復(fù)情況。 

可對(duì)PSC凍存試劑盒中提供的凍存培養(yǎng)基進(jìn)行分裝和重新冷凍保存么？ 

我們尚未嘗試此種操作。不過(guò)，這款培養(yǎng)基可在4度條件下穩(wěn)定保存6個(gè)月。我們的研發(fā)部門(mén)認(rèn)為本品中的各種成份均不會(huì)受凍融過(guò)程的很大影響；不過(guò)，這一操作確實(shí)未經(jīng)正式測(cè)試。 

GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基中bFGF的作用是什么？ 

bFGF對(duì)于細(xì)胞的存活與增殖至關(guān)重要。 

有哪些細(xì)胞系在無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)條件下通過(guò)了GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的測(cè)試？ 

有多株多能干細(xì)胞（PSC）系通過(guò)了GibcoTM Essential 8TM培養(yǎng)基的測(cè)試（Chen G, Gulbranson DR, Hou Z et al (2010) Chemically defined conditions for human iPSC derivation and culture.Nat Methods 8:424–429）。 

重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）能否與 Essential 8™ Flex 培養(yǎng)基一起使用？ 
可以。為確保單細(xì)胞傳代后多能干細(xì)胞（PSCs）的最佳回收率，在傳代前一天，應(yīng)用 Essential 8™ Flex 培養(yǎng)基培養(yǎng) PSCs。 

重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）能否以低于 0.5μg/cm2 的包被濃度使用？ 
rhLaminin - 521 的最佳工作濃度取決于細(xì)胞系，必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。不過(guò)，對(duì)于某些細(xì)胞系，低至 0.3μg/cm2 的包被濃度使用時(shí)，性能也不會(huì)下降。此外，在 4℃下包被培養(yǎng)板過(guò)夜，可支持低至 0.1μg/cm2 的包被濃度。 

從 feeder 依賴(lài)培養(yǎng)體系中轉(zhuǎn)移到重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）上的 Essential 8™培養(yǎng)基中的 PSCs，能否再轉(zhuǎn)移到玻連蛋白（VTN - N）上？ 
可以。在 rhLaminin - 521 基質(zhì)上傳代 2 次后，應(yīng)使用 Versene 或 EDTA 傳代 PSCs。 

重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）預(yù)包被板必須始終被液體覆蓋嗎？ 
是的，不要讓培養(yǎng)板上的層粘連蛋白干燥。 

重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）在使用前必須放在冰上嗎？ 
我們建議在準(zhǔn)備使用該產(chǎn)品時(shí)，將其放在冰上。 

在重組人層粘連蛋白 - 521（rhLaminin - 521）包被的培養(yǎng)板上，能否使用 EDTA 或 versene 對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行傳代？ 
可以使用 EDTA 或 versene。但是，不建議使用 dispase（分散酶）或 collagenase（膠原酶），因?yàn)檫@可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分化。 

多物種 KnockOut 血清替代物（產(chǎn)品編號(hào)：A3181501 和 A3181502）與 KnockOut 血清替代物（產(chǎn)品編號(hào)：10828010 和 10828028）有區(qū)別嗎？ 
這兩種產(chǎn)品的配方相同。多物種 KnockOut 血清替代物是僅用于研究的產(chǎn)品，設(shè)計(jì)用于基礎(chǔ)研究應(yīng)用，而 KnockOut 血清替代物推薦用于臨床前和臨床應(yīng)用。 

如果我目前正在使用 KnockOut 血清替代物，能否換成多物種 KnockOut 血清替代物？ 
可以。如果為基礎(chǔ)研究應(yīng)用而換成多物種 KnockOut 血清替代物，您對(duì)該產(chǎn)品的使用體驗(yàn)幾乎不會(huì)有變化，而且不需要監(jiān)管文件（或醫(yī)療器械許可）。 

多物種 KnockOut 血清替代物能經(jīng)歷多少次凍融循環(huán)？ 
該產(chǎn)品最多可經(jīng)歷 1 次凍融循環(huán)，因此建議解凍小瓶后，分裝成單次使用的量再冷凍。 

解凍后的多物種 KnockOut 血清替代物在 4℃下儲(chǔ)存的穩(wěn)定性如何？ 
該產(chǎn)品在 4℃下避光儲(chǔ)存時(shí)，穩(wěn)定性可達(dá) 4 周。 

從小鼠（ICR）滅活成纖維細(xì)胞分離所得的小鼠胚胎的性別是什么？ 
我們沒(méi)有確定胚胎的性別。這些胚胎來(lái)自多個(gè)同窩幼鼠，是雄性和雌性的混合體。 

接種小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（包括小鼠（ICR）滅活成纖維細(xì)胞）之前，培養(yǎng)容器需要包被嗎？ 
是的，培養(yǎng)容器需要用附著因子蛋白（產(chǎn)品編號(hào)：S006100）在 37℃下包被 30 分鐘，或在室溫下包被 2 小時(shí)。包被后的容器可立即使用，或在室溫下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá) 24 小時(shí)。 

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞應(yīng)在何時(shí)接種，這些細(xì)胞能使用多久？ 
這些細(xì)胞應(yīng)在接種胚胎干細(xì)胞（ESCs）或誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）前 24 小時(shí)接種，且只能使用 7 - 10 天。 

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的推薦接種密度是多少？為什么接種密度很關(guān)鍵？ 
我們推薦這些細(xì)胞的接種密度范圍為 2×10?至 5.5×10?個(gè)細(xì)胞 /cm2。一個(gè)不錯(cuò)的起始點(diǎn)是 3×10?個(gè)細(xì)胞 /cm2。如果飼養(yǎng)細(xì)胞過(guò)于稀疏，可能無(wú)法維持多能細(xì)胞的未分化狀態(tài)，而且多能細(xì)胞可能無(wú)法很好地附著。如果飼養(yǎng)細(xì)胞過(guò)于密集，飼養(yǎng)層可能會(huì)從培養(yǎng)板上脫落，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。 

CF1、CF6 和 DR4 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞有什么區(qū)別？ 
CF1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞沒(méi)有藥物抗性。CF6 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞對(duì)新霉素 / 遺傳霉素（G418）有抗性。DR4 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞對(duì)遺傳霉素（G418）、嘌呤霉素、潮霉素和 6 - 硫鳥(niǎo)嘌呤有抗性。 

重構(gòu)后的 StemFlex 培養(yǎng)基能否分裝冷凍后供以后使用？ 
可以。重構(gòu)后的完整 StemFlex 培養(yǎng)基可分裝并在 - 5 至 - 20℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá) 6 個(gè)月。或者，也可將補(bǔ)充劑分裝并在 - 5 至 - 20℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá) 6 個(gè)月。要避免多次凍融循環(huán)。 

我已經(jīng)制備了 1X 重構(gòu)的 StemFlex 培養(yǎng)基分裝，并將其冷凍在 - 20℃。能否在 37℃水浴中解凍這種重構(gòu)的培養(yǎng)基？ 
不可以。我們建議在室溫下或在 2 - 8℃下過(guò)夜解凍分裝的培養(yǎng)基。 

在 StemFlex 培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)多能干細(xì)胞（PSCs），推薦使用什么傳代方法？ 
在 StemFlex 培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng) PSCs，推薦使用 Versene 傳代法。 

在 StemFlex 培養(yǎng)基中進(jìn)行單細(xì)胞傳代時(shí)，需要使用 ROCK 抑制劑嗎？ 
在 rhLaminin - 521 上用 StemFlex 培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)，不需要使用 ROCK 抑制劑。不過(guò)，在單細(xì)胞傳代等應(yīng)激轉(zhuǎn)換過(guò)程中，補(bǔ)充 RevitaCell 補(bǔ)充劑可為 PSCs 提供額外支持。 

如果我對(duì) StemFlex 培養(yǎng)基的周末免換液培養(yǎng)方案不感興趣，還能每天給細(xì)胞換液?jiǎn)幔?/span> 
StemFlex 培養(yǎng)基可適應(yīng)大多數(shù)換液方案，包括每天換液和周末免換液方案。

你們推薦 Geltrex 作為 StemFlex 培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)的基質(zhì)。我也能使用玻連蛋白或重組人層粘連蛋白 - 521 嗎？ 
可以。我們建議遵循玻連蛋白或 rhLaminin - 521 的包被說(shuō)明，并采用 StemFlex 方案中的培養(yǎng)和傳代建議。 

StemFlex 培養(yǎng)基是無(wú)異種成分的嗎？ 
StemFlex 培養(yǎng)基的配方中含有牛血清白蛋白（BSA），因此不被認(rèn)為是無(wú)異種成分的。與 mTeSR1 相比，它的成分更明確，因?yàn)槠渑浞街泻械奈镔|(zhì)更少。Essential 8 和 Essential 8 Flex 被推薦為用于多能干細(xì)胞培養(yǎng)的成分最明確且無(wú)異種成分的培養(yǎng)基。 

StemFlex 培養(yǎng)基與 mTeSR 和 TeSR - E8 相比如何？ 
StemFlex 培養(yǎng)基比 TeSR - E8 更穩(wěn)定，但成分比 mTeSR 少。在許多應(yīng)用中，如單細(xì)胞傳代、基因編輯和重編程，StemFlex 培養(yǎng)基的性能被證明優(yōu)于 mTeSR1。 

我目前正在使用 mTeSR1。讓我的細(xì)胞適應(yīng) StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)難度大嗎？ 
這種轉(zhuǎn)換非常簡(jiǎn)單。我們建議至少經(jīng)過(guò) 2 次傳代，使細(xì)胞轉(zhuǎn)換到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，如果您有之前在 mTeSR1 / 基質(zhì)膠系統(tǒng)中培養(yǎng)的冷凍細(xì)胞，建議將細(xì)胞解凍后放回 mTeSR1 / 基質(zhì)膠中，直到恢復(fù)。當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到約 70% - 85% 時(shí)，使用 Versene 溶液傳代，并直接接種到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。 

在其他無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基系統(tǒng)中培養(yǎng)后冷凍的多能干細(xì)胞（PSCs），能否直接解凍到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中？ 
可以。在其他培養(yǎng)基系統(tǒng)中培養(yǎng)后冷凍的 PSCs 可直接解凍到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。不過(guò)，某些細(xì)胞系可能更適合先解凍到冷凍時(shí)所用的培養(yǎng)基和底物中，然后在下次傳代時(shí)，使用 Versene 溶液將細(xì)胞傳代到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。 

對(duì)于在 StemFlex 培養(yǎng)基中培養(yǎng)的多能干細(xì)胞（PSCs），推薦采用什么方案遞送 Cas9 蛋白：向?qū)?RNA 復(fù)合物？ 
我們推薦使用 Neon 電穿孔裝置，按照以下已驗(yàn)證方案中 “通過(guò) Neon 轉(zhuǎn)染系統(tǒng)電穿孔 RNP 進(jìn)行敲除" 部分的指導(dǎo)，對(duì) PSCs 進(jìn)行 Cas9 蛋白：向?qū)?RNA 復(fù)合物的電穿孔。我們發(fā)現(xiàn)，Neon 電穿孔方案 7 和 14 能在保持細(xì)胞存活的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)最佳的插入缺失形成。不過(guò)，可能需要針對(duì)您的多能細(xì)胞系優(yōu)化電穿孔條件。 

在基因編輯 / 流式分選實(shí)驗(yàn)中，為防止污染，能否在 StemFlex 培養(yǎng)基中使用抗生素？ 
可以。我們使用抗生物素 - 抗真菌素（產(chǎn)品編號(hào)：15240062）來(lái)進(jìn)一步防止污染。 

使用 StemFlex 培養(yǎng)基時(shí)，為了多能干細(xì)胞（PSCs）的克隆擴(kuò)增，在 96 孔板的每個(gè)孔中接種 1 - 5 個(gè)細(xì)胞，推薦采用什么換液方案？ 
我們建議每 3 天給細(xì)胞換液一次，即使在含有 RevitaCell 補(bǔ)充劑的情況下，培養(yǎng)約 14 天也是如此。 

在克隆擴(kuò)增流程中，當(dāng)在 96 孔板的每個(gè)孔中接種 1 - 5 個(gè)細(xì)胞時(shí)，我能使用 Geltrex 基質(zhì)代替 rhLaminin - 521 嗎？ 
我們尚未評(píng)估在 StemFlex 培養(yǎng)基存在的情況下，使用 Geltrex 基質(zhì)進(jìn)行克隆擴(kuò)增的效果。不過(guò)，rhLaminin - 521 在單細(xì)胞傳代后能為細(xì)胞提供最佳的存活條件，因此推薦這種基質(zhì)用于此類(lèi)關(guān)鍵應(yīng)用。 

StemFlex 培養(yǎng)基與賽默飛世爾科技的下游分化試劑盒兼容嗎？ 
可以。我們已證實(shí)它與賽默飛世爾科技的以下分化試劑盒兼容：多能干細(xì)胞心肌細(xì)胞分化試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：A2921201）、多能干細(xì)胞定型內(nèi)胚層誘導(dǎo)試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：A3062601）、多能干細(xì)胞神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：A1647801）和多能干細(xì)胞多巴胺能神經(jīng)元分化試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：A3147701）。 

能否使用 Essential 7 或 Essential 8 培養(yǎng)基重編程體細(xì)胞，并在收獲后將其轉(zhuǎn)移到 StemFlex 培養(yǎng)基中？ 
可以。如果需要提高重編程效率，您可以使用 Essential 7（Essential 6 + 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子）或 Essential 8 培養(yǎng)基重編程體細(xì)胞，并直接將其轉(zhuǎn)移到 StemFlex 培養(yǎng)基系統(tǒng)中。 

我有興趣在體細(xì)胞重編程中使用 StemFlex 培養(yǎng)基。對(duì)于人成纖維細(xì)胞，應(yīng)遵循什么方案？ 
我們已評(píng)估過(guò)使用 Cytotune - iPS 2.0 仙臺(tái)重編程試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：A16517）對(duì)新生兒和成人真皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞重編程的效果。對(duì)于成纖維細(xì)胞，請(qǐng)按照 Cytotune 2.0 重編程手冊(cè)中關(guān)于無(wú)飼養(yǎng)層重編程的說(shuō)明（第 16 - 20 頁(yè)）進(jìn)行操作。在第 7 天，您可以使用重組人 VTN - N（產(chǎn)品編號(hào)：A14700）、Geltrex 基質(zhì)（產(chǎn)品編號(hào)：A1413302）或重組人層粘連蛋白 - 521（產(chǎn)品編號(hào)：A29248 或 A29249）。從第 8 天起，不必每天用 Essential 8 培養(yǎng)基培養(yǎng)，我們建議每隔一天用 StemFlex 培養(yǎng)基培養(yǎng)重編程的成纖維細(xì)胞。 

我有興趣在體細(xì)胞重編程中使用 StemFlex 培養(yǎng)基。對(duì)于血細(xì)胞，應(yīng)遵循什么方案？ 
我們已評(píng)估過(guò)使用 Cytotune - iPS 2.0 仙臺(tái)重編程試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：A16517）對(duì) CD34 + 血細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞重編程的效果。對(duì)于 CD34 + 細(xì)胞，請(qǐng)按照 Cytotune 2.0 重編程手冊(cè)中關(guān)于無(wú)飼養(yǎng)層重編程的說(shuō)明（第 39 - 44 頁(yè)）進(jìn)行操作。在第 3 天，您可以使用重組人 VTN - N（產(chǎn)品編號(hào)：A14700）、Geltrex 基質(zhì)（產(chǎn)品編號(hào)：A1413302）或重組人層粘連蛋白 - 521（產(chǎn)品編號(hào)：A29248 或 A29249）。從第 8 天起，不必每天用 Essential 8 培養(yǎng)基培養(yǎng)，重編程的 CD34 + 細(xì)胞應(yīng)每隔一天用 StemFlex 培養(yǎng)基培養(yǎng)。 

StemFlex 培養(yǎng)基是否經(jīng)過(guò)小鼠胚胎干細(xì)胞（mESCs）生長(zhǎng)的評(píng)估？ 
StemFlex 培養(yǎng)基含有堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，已證明會(huì)導(dǎo)致小鼠胚胎干細(xì)胞（mESCs）分化為小鼠來(lái)源的上胚層干細(xì)胞（mEpiSCs）。此外，mESCs 對(duì)白血病抑制因子（LIF）有依賴(lài)性。因此，不推薦將 StemFlex 培養(yǎng)基用于 mESCs 的培養(yǎng)。 

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