ATCC 質(zhì)控菌株技術(shù)專欄 · 微生物檢測(cè)與標(biāo)準(zhǔn)化參考

一產(chǎn)品概述

二技術(shù)參數(shù)

下表匯總 白色念珠菌 的核心技術(shù)參數(shù)，便于在方法確認(rèn)與注冊(cè)資料中直接引用。

三生物學(xué)特性

在沙氏葡萄糖瓊脂(SDA)平板上，25°C培養(yǎng)48-72小時(shí)后，ATCC 10231形成的菌落呈乳白色至奶油色，表面光滑濕潤(rùn)，邊緣整齊，略微隆起呈凸面狀，具有典型的酵母菌落特征。顯微鏡下觀察為卵圓形出芽酵母細(xì)胞，大小約4-6微米，偶見(jiàn)假菌絲形成。假菌絲的出現(xiàn)與培養(yǎng)條件和傳代次數(shù)有關(guān)，這一點(diǎn)在實(shí)際操作中需要格外留意。
芽管試驗(yàn)是白色念珠菌鑒定中經(jīng)典的生化試驗(yàn)之一。將菌懸液接種于滅活血清中，37°C孵育2-3小時(shí)后鏡檢，可見(jiàn)從酵母細(xì)胞表面伸出管狀芽管，這是白色念珠菌區(qū)別于其他念珠菌種的重要依據(jù)。ATCC 10231的芽管試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，反應(yīng)典型且穩(wěn)定，這也是它被選為標(biāo)準(zhǔn)菌株的原因之一。

四培養(yǎng)條件與操作要點(diǎn)

日常培養(yǎng)推薦使用SDA或YM肉湯(酵母浸膏麥芽汁培養(yǎng)基)，PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)也可作為替代選擇。常規(guī)培養(yǎng)和傳代的適宜溫度為20-25°C，一般48-72小時(shí)即可獲得充分的菌落生長(zhǎng)。但在某些藥典試驗(yàn)中——例如抑菌效力檢查法中的接種培養(yǎng)，或者芽管試驗(yàn)——需要將培養(yǎng)溫度調(diào)整至35-37°C。
有一點(diǎn)值得注意：同一株菌在25°C和37°C下的形態(tài)表現(xiàn)可能不同。溫度偏高時(shí)更容易誘導(dǎo)假菌絲和菌絲體形成，這會(huì)給后續(xù)的菌落計(jì)數(shù)和菌懸液制備帶來(lái)麻煩。筆者的經(jīng)驗(yàn)是，日常傳代和菌懸液制備盡量在25°C下操作，只在藥典試驗(yàn)明確要求的環(huán)節(jié)才升溫至37°C。另外，SDA配制時(shí)pH應(yīng)調(diào)至約5.6，這對(duì)抑制細(xì)菌污染和促

五藥典與標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用

白色念珠菌 在全球主要藥典和標(biāo)準(zhǔn)體系中均有明確應(yīng)用規(guī)定：

• ### 美國(guó)藥典(USP)中的應(yīng)用

• USP<51>Antimicrobial Effectiveness Testing中，白色念珠菌作為酵母類代表菌被納入防腐效力挑戰(zhàn)試驗(yàn)的接種菌群，用于評(píng)估藥品和化妝品中防腐體系對(duì)真菌的抑制能力。USP<61>Microbial Enumeration Tests中，該菌用于酵母菌和霉菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證。USP<62>Tests for Specified Microorganisms同樣涉及白色念珠菌的相關(guān)檢測(cè)要求?？梢哉f(shuō)，在USP微生物學(xué)章節(jié)中，ATCC 10231的出鏡率非常高。

• 歐洲藥典對(duì)白色念珠菌的使用要求與USP基本一致。EP 2.6.12和2.6.13分別規(guī)定了非無(wú)菌產(chǎn)品的微生物計(jì)數(shù)法和特定微生物檢查法中該菌的應(yīng)用。EP 5.1.3和5.1.4則涉及抑菌效力評(píng)價(jià)相關(guān)內(nèi)容。做出口歐盟產(chǎn)品的企業(yè)，在方法驗(yàn)證時(shí)通常需要同時(shí)滿足EP和USP的雙重要求。

• ### 中國(guó)藥典中的應(yīng)用

• 《中國(guó)藥典》2020年版四部通則中，白色念珠菌出現(xiàn)在多個(gè)章節(jié)。通則1105(微生物計(jì)數(shù)法)中將其列為酵母菌和霉菌計(jì)數(shù)的代表菌種，用于培養(yǎng)基適用性檢查和方法驗(yàn)證。通則1106(控制菌檢查法)和1107涉及特定微生物的檢測(cè)。通則1121(抑菌效力檢查法)中，白色念珠菌是挑戰(zhàn)試驗(yàn)中主要指定的酵母類標(biāo)準(zhǔn)菌株。在國(guó)內(nèi)藥品生產(chǎn)企業(yè)中，這株菌的使用頻率可能是所有真菌標(biāo)準(zhǔn)株中較高的。

• ### 消毒技術(shù)規(guī)范與國(guó)標(biāo)中的應(yīng)用

六質(zhì)控用途

除了上述藥典和標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定的用途之外，ATCC 10231在日常質(zhì)控工作中還有不少應(yīng)用場(chǎng)景。比如新批次培養(yǎng)基(如SDA、玫瑰紅鈉瓊脂等)到貨后，實(shí)驗(yàn)室通常會(huì)用這株菌做生長(zhǎng)促性試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)收。又比如在進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)方法確認(rèn)時(shí)，白色念珠菌可作為真菌回收率的參照?？拐婢幬锏乃幟粼囼?yàn)、消毒劑的殺真菌效力評(píng)估、防腐體系的配方篩選，都離不開(kāi)這株菌。

七菌種保藏與管理

菌種管理是標(biāo)準(zhǔn)菌株使用中最容易被忽視卻又關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。ATCC 10231的凍干品應(yīng)保存于2-8°C冰箱中，避免反復(fù)溫度波動(dòng)。開(kāi)啟后如需長(zhǎng)期保藏，推薦制備甘油凍存管保存于-80°C，每管分裝適量，用時(shí)取出一管即可。短期使用可制備SDA斜面，2-8°C保存，但建議不超過(guò)一個(gè)月。
這里要特別強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)：白色念珠菌不宜反復(fù)傳代。過(guò)多傳代會(huì)導(dǎo)致菌株的形態(tài)和生理特性發(fā)生漂移，典型的表現(xiàn)就是假菌絲形成能力改變、芽管試驗(yàn)反應(yīng)減弱，甚至菌落形態(tài)變異。筆者的做法是，從凍存管復(fù)蘇后制備工作菌株，控制傳代不超過(guò)5代，

八注意事項(xiàng)

• 雖然ATCC將白色念珠菌標(biāo)注為BSL-1級(jí)別，但操作時(shí)仍應(yīng)按照良好的微生物學(xué)操作規(guī)范進(jìn)行。白色念珠菌是已知的人體條件致病菌，可引起口腔、皮膚及黏膜感染，免疫力低下人群尤其需要注意。建議在生物安全柜中進(jìn)行所有涉及活菌的操作，操作者穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套和護(hù)目鏡。

• 廢棄的含菌培養(yǎng)物和耗材須經(jīng)121°C高壓滅菌至少30分鐘后方可丟棄。工作臺(tái)面在操作完成后用75%乙醇或適宜的消毒劑充分擦拭。另外，部分地方性法規(guī)或機(jī)構(gòu)內(nèi)部規(guī)程可能要求按BSL-2標(biāo)準(zhǔn)管理白色念珠菌，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)確認(rèn)所在機(jī)構(gòu)的具體要求，不可一概而論。

9采購(gòu)指引

10免責(zé)聲明