ATCC 質控菌株技術專欄 · 微生物檢測與標準化參考

一產品概述

二技術參數

下表匯總 巴西曲霉 的核心技術參數，便于在方法確認與注冊資料中直接引用。

三生物學特性

在PDA或察氏培養基上，ATCC 16404的菌落生長過程有明顯的階段性變化。初期菌落呈白色或淡黃色，菌絲生長較快，隨著分生孢子的形成，表面逐漸覆蓋一層厚厚的孢子層。成熟菌落顏色從深褐色過渡到黑色，這也是它曾經被歸為"黑曲霉"的直觀原因。
顯微鏡下觀察，分生孢子呈球形，直徑約4至5微米，顏色為中等至深褐色。孢子表面粗糙，可見脊狀突起和鈍頭或尖頭的疣狀結構，這些形態特征是曲霉屬黑曲霉組的典型特征。分生孢子梗頂端膨大為泡囊，其上密生瓶梗，產孢方式為鏈狀產孢。

四培養條件與操作要點

ATCC 16404的推薦培養溫度為25攝氏度(室溫培養)，常用培養基包括馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)、察氏培養基(Czapek agar)和沙氏葡萄糖瓊脂(SDA)。在PDA上一般3至7天可形成典型菌落，察氏培養基上生長速度略慢一些。與細菌相比，霉菌的培養周期明顯更長，這一點在安排實驗計劃時務必提前考慮。
孢子收獲方面，筆者建議在培養5至7天、菌落充分變黑后進行。用含0.05%吐溫80的無菌生理鹽水或PBS沖洗菌落表面，以無菌L棒輕輕刮取，收集孢子懸液。操作時注意力度適中，避免將培養基碎塊帶入懸液。孢子懸液經脫脂棉或無菌紗布過濾后可去除大部分菌絲碎片，便于后續計數。如果需要較高的孢子回收率，可

五藥典與標準應用

巴西曲霉 在全球主要藥典和標準體系中均有明確應用規定：

• 巴西曲霉(黑曲霉)是目前各主要藥典中主要指定的霉菌標準菌株，覆蓋面非常廣。在美國藥典(USP)中，ATCC 16404被列入通則<51>防腐效力測試(Antimicrobial Effectiveness Testing)作為霉菌代表菌種，同時也在<61>微生物計數法中用于酵母菌和霉菌的計數方法驗證。歐洲藥典(EP)通則2.6.12和5.1.3同樣收錄了該菌株。

• 《中國藥典》2020年版四部中，通則1105(酵母菌和霉菌計數法)、1107及1121(抑菌效力檢查法)均指定使用該菌株。在行業標準方面，ISO 11930和ISO 16212涉及化妝品抗霉菌防腐效力評價，GB 15979一次性使用衛生用品衛生標準中也涉及霉菌檢測的質控要求。此外，食品防腐劑的防霉能力評價和培養基促生長試驗中，ATCC 16404同樣是推薦質控菌株。

六質控用途

從筆者的工作經驗來看，ATCC 16404在以下幾類場景中出場率較高。重要是防腐劑挑戰試驗，無論是藥品、化妝品還是日化產品，都需要用這株菌驗證配方對霉菌的抑制能力。第二是培養基質量評估，每批新到的PDA或SDA在使用前需要用標準菌株做促生長試驗，ATCC 16404是霉菌類的必選菌種。第三是微生物計數方法驗證，特別是薄膜過濾法和直接接種法的回收率驗證。
另外，在消毒劑效力評價和環境監測方法確認中，有時也會用到這株菌。由于霉菌孢子對化學消毒劑的抵抗力通常強于細菌繁殖體，用ATCC 16404做挑戰

七菌種保藏與管理

孢子懸液的制備和低溫保藏是日常菌種管理的核心環節。將收獲的新鮮孢子懸液用含15%至20%甘油的凍存液調整至合適濃度(通常為10^6至10^7 CFU/mL)，分裝至無菌凍存管中，每管0.5至1.0 mL，置于-80攝氏度冰箱保存。在規范操作條件下，孢子懸液在-80攝氏度可穩定保存一年以上。
使用時取出一管快速復蘇(37攝氏度水浴1至2分鐘)，稀釋至工作濃度即可。關鍵原則是避免反復凍融，每管只使用一次。傳代管理方面，應盡量從ATCC或授權經銷商處獲取原始菌種，自行傳代不宜超過5代。過多的傳代次數可

八注意事項

• ATCC 16404的生物安全等級為一級(BSL-1)，屬于對人類健康風險較低的微生物類別。但這并不意味著可以掉以輕心。曲霉屬真菌的分生孢子直徑僅4至5微米，極易在空氣中擴散，吸入后可能引起過敏反應或呼吸道刺激，對免疫系統受損的人群尤其如此。

• 因此，所有涉及孢子操作的步驟都應在二級生物安全柜(BSC)內進行。開蓋、刮取孢子、制備懸液這些容易產生氣溶膠的操作尤其要注意。操作人員應穿戴實驗服、手套和口罩。廢棄的菌落和培養物須經121攝氏度高壓滅菌至少30分鐘后方可按醫療廢物處理。實驗室應保持良好通風，定期對生物安全柜和操作臺面進行清潔消毒。

9采購指引

10免責聲明