細胞身份與編號體系

• 命名：HPSC-3223-hTERT/SV40

• 內部編號：3223 代表 2023 年 3 月建系的第 2 株，避免與早期批次混淆

• STR 指紋：D5S818=11,12；D13S317=9,11；D7S820=10,12；與 ATCC 數據庫無交叉

基因插入方式與拷貝數

• hTERT：慢病毒載體 EF1α 啟動子，MOI=3，單拷貝整合于 5q31.1 安全港位點

• SV40 大 T 抗原：逆轉錄病毒載體 MSCV-LTR 啟動子，雙拷貝整合于 19p13.3 和 20q13.2

• 插入位點通過 Splinkerette PCR 驗證，無鄰近抑癌基因破壞

倍增動力學窗口

• PDT（群體倍增時間）：22–26 h（DMEM/F12+10 % FBS，37 °C，5 % CO?）

• 連續傳代極限：實測 85 代無衰老跡象，代數標記以復蘇當日為 P0

• 生長曲線拐點：>P90 出現倍增時間延長 15 %，建議啟用早期備份

表面標志物基準值

• CD90-FITC：>95 % 陽性，MFI 5.3×10?

• CD73-PE：>98 % 陽性，MFI 4.1×10?

• CD45-APC：<0.5 % 陽性，確保無造血污染

• 流式檢測每 5 代復檢一次，漂移超過 5 % 即觸發品質警報

功能性分泌譜

• IL-6：基線 120 pg/mL，LPS 刺激 24 h 后升至 4.5 ng/mL

• VEGF-A：基線 850 pg/mL，缺氧 24 h 后升至 12 ng/mL

• Collagen I：每 10? 細胞 48 h 分泌 18 μg，ELISA 定量

• 功能漂移判定：任一指標下降 30 % 視為批次失效

核型與基因組穩定性

• 標準核型：46,XY，30 代內無克隆性異常

• CNV 負荷：<0.03 事件/Mb（low-pass WGS，0.5×）

• SNP 突變率：全外顯子測序 0.2/Mb，低于背景 0.5/Mb 閾值

• 每 10 代提交第三方檢測，報告公開下載

凍存與復蘇規格

• 凍存液：90 % FBS + 10 % DMSO，細胞密度 5×10? cells/mL

• 凍存管規格：1 mL/支，含 10 % 過量細胞量補償復蘇損失

• 復蘇存活率：臺盼藍法 ≥90 %，24 h 貼壁率 ≥85 %

• 運輸條件：干冰 ≥5 kg，48 h 內溫控記錄可追溯

支原體與無菌檢測

• 支原體：熒光法 + PCR 雙檢，靈敏度 10 CFU/mL

• 細菌真菌：14 天培養陰性

• 內毒素：<0.25 EU/mL，適用于后續動物移植實驗

配套培養基配方

• 基礎培養基：DMEM/F12（1:1），含 GlutaMAX

• 添加組分：10 % 批次驗證 FBS、1 % ITS-X、1 % NEAA、55 μM β-巰基乙醇

• 抗生素：Pen-Strep 100 U/mL，常規培養 2 代后撤除，避免干擾外泌體實驗

文檔與批次追溯

• 隨貨文件：STR 報告、核型圖、支原體證書、功能檢測報告

• 電子追蹤：二維碼掃描即得完整批次履歷，支持一鍵導入 LIMS 系統