背景與需求定位

原代胰腺成纖維細胞在體外只能維持 5–8 代，很快進入衰老期，無法支撐長周期實驗。SV40 大 T 抗原介導的永生化技術突破了這一限制，使細胞獲得持續增殖能力，同時保留胰腺微環境分泌表型。選購前，先回答三個核心問題：

• 實驗周期是否超過 8 周？

• 是否需要可重復批次的同質細胞？

• 下游是否涉及基因編輯或 3D 共培養？

若答案皆為“是"，永生化人胰腺成纖維細胞-SV40 才是值得投入的資源。

關鍵質量指標拆解

1. SV40 整合位點與拷貝數

整合位點決定基因表達穩定性。優選單拷貝、AAVS1 安全位點敲入的株系，避免多拷貝隨機整合造成的染色體不穩定。qPCR 檢測報告應給出 T 抗原拷貝數 ≤2，Southern blot 條帶單一。

2. 成纖維標志物表達譜

合格產品需同時滿足：

• Vimentin、FSP1 陽性率 ≥ 98%

• α-SMA 陽性率 ≤ 5%，確保低活化狀態

• Keratin 陰性，排除上皮污染

流式原始圖譜應隨貨附帶，不接受僅提供柱狀圖的形式。

3. 功能分泌驗證

胰腺成纖維細胞的核心價值在于分泌因子支持類器官生長。索取以下數據：

• ELISA 檢測 IL-6、HGF、FGF2 分泌量，連續 5 代變異系數 < 15%

• 與胰腺導管類器官共培養 7 d，類器官形成率 ≥ 80%，直徑均一

供應商審計清單

現場審計時重點查看液氮罐批號與出庫記錄是否對應，避免“同樣"細胞。

包裝規格與配套試劑

• 凍存管：1 × 10^6 cells / mL，每袋 1 mL，外盒鋁箔真空袋

• 專屬培養基：500 mL 基礎 DMEM + 10 % FBS + 1 % ITS-X + 1 ng/mL FGF2，隨細胞贈送 50 mL 試用裝

• 支原體清除試劑盒：若復蘇后檢測陽性，供應商承諾免費補發一次細胞與清除試劑

拒絕僅提供“通用成纖維培養基"的供應商，胰腺微環境特異性因子缺失會導致細胞性狀漂移。

價格區間與性價比

若實驗室已有穩定培養基配方，選擇最小規格即可；若計劃做共培養或 PDX 模型，直接購買帶驗證報告的套餐，節省 2–3 周驗證時間。

合同陷阱與維權要點

• 細胞到達 7 d 內出現支原體陽性，供應商需全額退款或重發，寫進合同而非口頭承諾

• STR 圖譜與說明書不符，視為批次錯誤，可要求雙倍賠償

• 禁止“僅接受原包裝退貨"條款，復蘇后細胞仍享有同等質保

保留干冰運輸照片、開箱視頻，作為維權證據。

到貨驗收 SOP

1. 拍攝外箱溫度指示卡，確認未超溫

2. 37 ℃水浴 90 s 快速復蘇，臺盼藍計數活率 ≥ 85%

3. 復蘇 24 h 后取樣做支原體 qPCR，結果存檔

4. 第 3 代時流式復核成纖維標志物，與 COA 對照

以上步驟全部合格，才簽署驗收單。

長期儲存建議

• 液氮氣相區存儲，避免液相交叉污染

• 每 6 個月抽樣復蘇，檢測倍增時間；若 PD 時間延長 > 20%，立即啟用新批次

• 建立實驗室內部編號體系，記錄每一次凍存與復蘇日期，防止批次混淆