Mouse VEGF ELISA Kit 技術參數拆解：把 165 與 120 兩個數字讀透

時間：2025/9/11閱讀：395

VEGF-A 的氨基酸長度從 121 到 206 不等，市面上所有 Mouse VEGF ELISA Kit 幾乎都以 VEGF165 為校準骨架。同一批血清樣本，用識別 165 的盒子測出 400 pg/mL，換 120 kit 可能只剩 120 pg/mL。把技術參數拆成 7 個維度，每個維度給出實測邊界值，以后拿到 COA 直接對號入座，10 min 就能判斷這支盒子能否匹配你的樣本類型。

1. 捕獲抗體表位：114–126 區段是黃金坐標

晶體結構顯示 VEGF165 的受體結合域在 114–126 位氨基酸。

驗證方法：

說明書“Immunogen"若寫“recombinant mouse VEGF164 (aa 114–126)"或“VEGF-A (K123-R140)"，說明表位覆蓋受體結合域，檢測的是生物活性形式。
出現“VEGF120 full length"或“VEGF188 N-term"直接跳過，腫瘤組織里 120 亞型高，結果會虛高 30 %–50 %。

2. 標準品分子量：39 kDa 還是 42 kDa 決定換算系數

VEGF165 糖基化后 42 kDa，非糖基化 39 kDa。

關鍵參數：

COA 里“Molecular mass of calibrator"寫 39 kDa，代表 E.coli 表達，無翻譯后修飾；寫 42 kDa 則是 CHO 真核表達，更接近血清天然形態。
做腫瘤勻漿選 42 kDa，做細胞上清或基因敲除驗證選 39 kDa，批間差更小。

3. 檢測限與功能靈敏度：0.9 pg/mL 只是理論值

廠商把 2 倍空白標準差當檢測限（LOD），實際樣本里基質背景能把 LOD 抬高 3 倍。

實測步驟：

取 6 只 C57BL/6 小鼠基礎血清，各 100 µL，加 3 個濃度標準品（2、5、10 pg/mL）做回收。回收率 80–120 % 的低濃度才是“功能靈敏度"。
功能靈敏度 ≤5 pg/mL 的盒子才夠測正常小鼠血漿，高于 10 pg/mL 只能測腫瘤或缺血模型。

4. Hook 效應上限：30 000 pg/mL 是紅線

VEGF 過表達質粒轉染 48 h 后，細胞上清濃度能沖到 25 000 pg/mL。

參數判讀：

說明書“Upper limit of quantification (Hook)"≥30 000 pg/mL，代表抗體親和足夠，高劑量不會假低。
若只寫 10 000 pg/mL，腫瘤裂解液必須預稀釋 1:5，否則落在 Hook 區，結果比真值低 40 %。

5. 亞型交叉矩陣：120、164、188 各占多少？

VEGF-A 基因外顯子 6 和 7 剪接差異產生 120、164、188 三個主要亞型。

交叉率表格：

亞型	交叉率	備注
VEGF120	100 %	缺外顯子 7，肝素結合域缺失
VEGF164	100 %	校準骨架
VEGF188	≤5 %	含外顯子 6+7，高分子量
交叉率 >10 % 的盒子會把 188 算進來，腫瘤組織結果虛高。優先選“VEGF188 cross-reactivity <3 %"的批號。

6. 回收與稀釋線性：1:2 和 1:8 都要過關

小鼠血清含脂蛋白顆粒，容易把 VEGF 包埋。

合格線：

加入 100、1000、4000 pg/mL 標準品，回收率 90–110 %。
1:2、1:4、1:8 三個稀釋比，線性相關系數 r≥0.99，斜率 0.9–1.1。

滿足兩項指標，說明稀釋液里已含解離劑，無需額外加 0.1 % Tween-20。

7. 批間差與加速穩定性：37 °C 7 天偏差 <8 %

VEGF 標準品含肝素穩定劑，但糖基化位點仍易氧化。

質控技巧：

COA 附“Accelerated stability test"：37 °C 7 天，標準曲線 ED50 偏差 <8 %。
無此項數據的批次，到貨立即分裝 –20 °C，避免反復凍融導致標準品降 15 %。

8. 技術參數速查表（貼實驗臺）

參數	合格線	高危提示
表位	114–126 aa	缺受體結合域
標準品 MW	39/42 kDa 明確標注	未寫 MW
功能靈敏度	≤5 pg/mL	>10 pg/mL
Hook 上限	≥30 000 pg/mL	<20 000 pg/mL
VEGF188 交叉	≤5 %	>10 %
回收率	90–110 %	超出 85–115 %
37 °C 穩定性	偏差 <8 %	無加速數據

把 7 項指標全部打鉤再下單，基本能把腫瘤勻漿、缺血視網膜、細胞上清三種樣本一次性測準。