市面產品分為兩類:一類同時提取膜蛋白和胞漿蛋白但混合在一起;另一類分步獲得兩個獨立組分。KTP3005屬于分步提取型,先收胞漿蛋白,再裂解沉淀收膜蛋白。選購時確認產品說明中的“順序提取"字樣,否則可能買到混合型,無法單獨分析胞漿組分。
貼壁細胞、懸浮細胞、軟組織、硬組織對提取試劑的要求不同。KTP3005對新鮮軟組織效果較好,但用于肝臟、脾臟等富含結締組織的樣本時,需要額外添加膠原酶預處理。查閱產品技術手冊中已驗證的樣本列表,重點查看是否包含你的樣本類型。部分試劑盒對石蠟包埋組織無效。
膜蛋白提取常用SDS、NP-40、Triton X-100、CHAPS等去污劑。SDS提取效率高,但會-完-全-破壞蛋白天然構象,不適合免疫共沉淀或酶活測定。KTP3005選用溫和型去污劑(如Digitonin),保留膜蛋白的抗原表位和部分活性。選購前明確下游實驗:若做Western Blot,任何去污劑均可;若做Co-IP,務必確認試劑盒不含SDS。
高純度意味著犧牲一部分產率。KTP3005的典型產率為膜蛋白0.5-1.5mg/g組織,胞漿蛋白3-8mg/g組織,純度通過SDS-PAGE驗證時膜蛋白條帶背景較低。需要高回收率時,選擇強去污劑試劑盒但純度下降;需要高純度時,接受較低產率并增加起始樣本量。
一套完整的試劑盒應包含:裂解液A(胞漿提取)、裂解液B(膜提取)、蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑、洗滌緩沖液、沉淀輔助試劑。KTP3005額外提供膜蛋白增溶試劑,用于處理難溶的整合膜蛋白。缺少抑制劑或輔助試劑的試劑盒需要另購,增加成本。
向供應商索取批次間差異報告(COA),重點關注裂解液的pH值和電導率波動范圍。優質試劑盒的pH波動小于±0.05,電導率變異系數低于5%。穩定性差的試劑盒導致不同批次提取效率偏差30%以上。
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溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。