摘要: 小麥(Triticum aestivumL.)遺傳轉化周期長、再生困難,對陽性苗的早期篩選至關重要。由于小麥組織富含葉綠素及酚類物質,背景熒光干擾強,傳統顯微鏡觀察難度大。本文提出利用LUYOR-3415RG高強度手持熒光燈對小麥T0代再生苗進行GFP標記的快速篩查,顯著提高育種效率。
與擬南芥和煙草不同,小麥組織在紫外光激發下會產生強烈的紅色/橙色自發熒光(Autofluorescence),這會掩蓋微弱的GFP信號。此外,小麥葉片蠟質層厚,普通手電筒光線無法穿透,導致“看著像亮了,其實沒亮"。
儀器: LUYOR-3415RG(365nm/450nm 雙波段)
方法:
暗適應:將待檢小麥組培苗置于黑暗環境30分鐘(消耗葉綠素熒光,降低背景噪音)。
高強度激發:使用LUYOR-3415RG的365nm(UV檔),緊貼小麥葉片基部或幼嫩葉鞘照射。
信號識別:
真陽性:呈現亮綠色、點狀分布,邊界清晰,且亮度隨激發時間不衰減。
假陽性(自發熒光):呈現彌散的紅褐色,亮度隨照射時間迅速減弱。
步驟 | 操作細節 | 備注 |
|---|---|---|
取材 | 選取小麥T0代再生苗的新生葉尖或根尖 | 分生組織區信號強 |
預處理 | 暗處理30min,或用75%酒精擦拭葉片表面 | 去除蠟質層反光 |
照射 | LUYOR-3415RG 365nm檔,距離3-5cm | 避免直射人眼 |
分選 | 陽性苗移栽,陰性苗淘汰 | 淘汰率可達70%以上 |
在未使用3415RG之前,實驗室需要對所有再生苗進行PCR鑒定,單株成本約20元,耗時3天。
使用后一分鐘

LUYOR-3415RG憑借其高功率密度,有效克服了小麥組織的背景干擾,是小麥、水稻等單子葉作物轉基因篩選的理想工具。
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