豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒

說明書

【產品名稱】

通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒

英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To

Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus（PRRSV Ab）,ELISA

【規格】

96 T×1

【預期用途】

本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體，可用于評估感染豬的血清學診斷以及豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗免疫狀況分析。

【檢驗原理】

本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標抗豬IgG抗體"復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后，經酶標儀檢測所得結果超過設定的臨界值時結果判為陽性，即表明免疫產生了抗體或有自然感染存在。                             

【主要成份】

【自備器材】

1．酶標儀，雙波長450/630 nm濾光片

2．微量移液器（單道10-100 μl、0.5-10 μl、多道30-300 μl）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．一次性槍頭（10 μl，200 μl）

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2 ℃－8 ℃貯存應不超過一周，長期應在－20℃以下保存。

2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的血清樣本。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30 min，可以獲得最佳結果。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋 （例:將5 μl樣本加至195 μl樣本稀釋液中）。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋10倍（例：將10 ml洗滌液加入90 ml去離子水中）。若10倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正常現象，放置37 ℃至溶解后即可。

【檢驗方法】

1. 加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100 μl于相應孔中（可不設空白對照）。其余為樣本孔，每孔加100 μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本。

2. 溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。

3. 洗板：甩去孔內液體，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10 s，直接甩出，洗滌3次，最后一次洗滌后吸干板內液體。

4. 加酶：每孔加酶標記物100 μl。

5. 溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。

6. 洗板：同步驟3。

7. 顯色：每孔加顯色劑100 μl，振蕩混勻，37 ℃避光反應10 min。

8. 終止：每孔加終止液50 μl，振蕩10 s，充分混勻，終止后即讀數。

9. 讀數：以450 nm/ 630 nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。充分混勻，終止后即讀數。

【結果判定】

在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.60，陰性對照孔的平均OD值＜0.40；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理: 

 S/P=(樣本OD_450/630值－NCx(—))/(PCx(—)－NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值（若小于0.05，則按照0.05計算），PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值；

當樣本的S/P≥0.20時判為陽性；樣品S/P值＜0.20時判為陰性。

【注意事項】

1.請在使用試劑盒之前，仔細閱讀說明書。

2．請不要使用過期的試劑盒組分，不要將不同批次的組分混合使用。

3．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應經121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min，或用5.0 g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30 min后廢棄。

4．未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2 ℃-8 ℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2 ℃-8 ℃避光保存。

5．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經常校對其準確性。

6．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

7．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。

【規格】 96孔/192孔/480孔/盒

【貯藏與有效期】  2~8℃保存，有效期為12個月。

僅供科研使用