Section.01

衣康酸: “人設崩塌"？

Section.02

衣康酸促炎: 文獻研究思路

? 肺泡巨噬細胞 (AMs) 分離：從小鼠肺組織中分離 AMs，純度高于 95%。

? 骨髓來源巨噬細胞 (BMDMs) 培養：通過體外培養骨髓細胞獲取。

? 標記策略：使用 glutamine-¹³C₅ 進行代謝標記實驗；在無血清 DMEM 培養基中添加 2mM glutamine-¹³C₅ 替換普通谷氨酰胺。

? 標記時間：細胞在 37℃、5% CO₂ 條件下孵育 4 h。

? 實驗分組：對照組：僅用 LPS (100 ng/Ml) 刺激 4 h;衣康酸處理組：衣康酸 (7.5 mM) 預處理 3 h，再 LPS 刺激 4 h；自然豐度對照組：為標記的普通谷氨酰胺培養基，用于本地校正。

? 快速淬滅代謝反應：實驗結束后，快速用液氮速凍細胞，終止代謝活動。

? 代謝物提取：使用 80% 甲醇 (-80℃ 預冷) 裂解細胞，離心后收集上清液；采用凍干法濃縮代謝物。

? 衍生化處理 (GC-MS 分析)：代謝物經 MOX 試劑 (甲氧胺鹽酸鹽) 和 MSTFA (硅烷化試劑) 衍生，提升 GC-MS 檢測靈敏度。

? GC-MS 檢測：檢測衣康酸、琥珀酸、富馬酸等 TCA 循環中間產物。

? LC-MS/MS：MRM，定量 ¹³C 標記代謝物。

? 代謝流計算：使用 MetaboAnalyst 5.0 和 SIMCA-P 進行多元統計分析；計算 ¹³C 標記比例，解析代謝通量變化 (如琥珀酸→富馬酸)。

? 關鍵發現：衣康酸顯著抑制琥珀酸脫氫酶 (SDH) ，導致 ¹³C-琥珀酸堆積； AMs 通過增強線粒體復合物 I (ETC-CI) 活性補償能量缺口，進而激活炎癥信號。

Section.03

同位素標記物---科研核心工具

傳統代謝組學僅能測定代謝物靜態濃度，而 ¹³C 穩定同位素標記技術可動態追蹤谷氨酰胺 -¹³C₅ 在 TCA 循環中的流向，明確衣康酸抑制 SDH 的關鍵節點；通過計算 ¹³C 標記代謝物的同位素豐度分布，精確評估代謝通量變化。

通過 ¹³C 標記的琥珀酸與未標記物的對比，排除實驗干擾，確認衣康酸直接作用于 SDH ；證實衣康酸特異性誘導 AMs 發生代謝重編程，而 BMDMs 未出現相同的代謝表型。

同位素示蹤數據表明，AMs 因肺泡微環境特性 (如低氧、低葡萄糖) 主要依賴氧化磷酸化供能，而 BMDMs 以糖酵解為主；衣康酸通過抑制 SDH 導致 AMs 中琥珀酸累積，進而通過以下機制觸發促炎效應：琥珀酸介導的線粒體 ROS 生成增加、激活 HIF-1α 信號通路及促進 NLRP3 炎癥小體組裝與活化。這些發現建立了代謝物動態變化與炎癥反應調控的直接分子關聯。

GC-MS 與 LC-MS/MS 的結合使用，全面覆蓋 TCA 循環中關鍵中間體及其代謝物，檢測靈敏度高范圍寬。

Section.04

小結