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JC-1

MCE 國際站：JC-1

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-15534

CAS：3520-43-2

Synonyms：CBIC2

純度：99.0%

存儲條件：4°C，密封保存，避光防潮 *溶劑中：-80°C，6個月；-20°C，1個月（密封保存，避光防潮）

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：JC-1 (CBIC2) 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位的理想熒光探針。JC-1 染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內，JC-1 聚集在線粒體基質中形成聚合物，聚合物發出強烈的紅色熒光 (Ex=488 nm, Em=595 nm) ；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，產生綠色熒光 (Ex=488 nm, Em=530 nm) 。

生物活性：JC-1 (CBIC2) 是一種熒光親脂性羰花青染料，用于測量線粒體膜電位。 JC-1 在高 ΔΨm 處形成稱為 J-聚集體的復合物。 JC-1 的聚集體發出橙紅色熒光 (Ex/Em=585/590 nm)。在具有低 ΔΨm 的細胞中，JC-1 保持單體形式。 JC-1 單體發出綠色熒光 (Ex/Em=510/527 nm)。 

體外： 指南（以下是我們推薦的方案。該方案僅提供指南，應根據您的具體需要進行修改）。
細胞標記：
1. 在 6、12、24 或 96 孔板中以 5×10⁵ 細胞/mL 的密度培養細胞。根據您的正常方案孵育細胞。
2. 確保 JC-1 和 DMSO 已平衡至室溫，然后將一小瓶內容物溶解在提供的 DMSO 中，制備 200 μM 儲備液。
3. 對于對照管，讓CCCP 小瓶達到室溫，加入1 μL CCCP (50 mM)。在 37°C 下孵育細胞 5 分鐘。
4. 每孔加入10 μL JC-1 (200 μM)，使終濃度為2 μM。在 37°C、5% CO₂ 下孵育細胞 15-20 分鐘。如果后面有附加標簽，例如使用膜聯蛋白 V，則從步驟 2.a 開始。如果不是，請繼續執行步驟 1.e。
5. 孵育后，4℃，400×g離心細胞3-4分鐘，小心吸去上清液。
6. PBS(1×)洗細胞2次：加入2mL PBS(1×)重懸細胞，渦旋混勻。在 4°C 下以 400×g 離心細胞 3-4 分鐘，小心吸出上清液。
7. 加入500 μL PBS（1×）懸浮細胞。在流式細胞儀、熒光顯微鏡或熒光酶標儀上分析樣本。

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參考文獻：
[1]. A Perelman, et al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3:e430.
[2]. Vera C. Keil, et al. Ratiometric high-resolution imaging of JC-1 fluorescence reveals the subcellular heterogeneity of astrocytic mitochondria. Pflügers Archiv - European Journal of Physiology. 2011,462(5): 693-708.
[3]. Jung-Ho LEE, et al. Real-time analysis of amyloid fibril formation of α-synuclein using a fibrillation-state-specific fluorescent probe of JC-1. Biochem. J. 2009, 418:311-323.
[4]. Salvioli S, et al. JC-1, but not DiOC6(3) or rhodamine 123, is a reliable fluorescent probe to assess delta psi changes in intact cells: implications for studies on mitochondrial functionality during apoptosis. FEBS Lett. 1997 Jul 7;411(1):77-82.