DASPEI染料在線粒體靶向高特異性、低毒性適配敏感樣本、優異的光穩定性、大斯托克斯位移、多色聯用無串擾等方面表現優異,具體如下:
線粒體靶向的高特異性與低干擾
DASPEI的雙特性分子結構(親脂性苯乙烯基長鏈 + 陽離子吡啶基團)使其能精準靶向線粒體:長鏈通過疏水作用嵌入線粒體膜脂質雙分子層,陽離子基團借助線粒體膜電位(ΔΨm, -150~-180 mV)的靜電引力富集于基質。其定位特異性達97%以上,脫靶率<3%,不與內質網、溶酶體交叉染色。與傳統紅色線粒體探針(如MitoTracker Red)相比,DASPEI分子量更小(≈365 Da),更易穿透細胞膜,且對線粒體膜的損傷更小,尤其適合膜結構敏感的細胞(如精子細胞、原代神經元)。
低毒性適配敏感樣本
DASPEI在低濃度(0.5-5 μM)下對線粒體呼吸鏈活性(ATP生成量)、細胞增殖及分化無顯著影響。例如:
精子細胞標記后活力>90%,運動能力正常,可用于精子線粒體功能評估;
原代神經元標記后軸突生長速度與突觸形成率無變化,適合神經細胞線粒體運輸研究;
探針自身ROS生成量<2%,遠低于MitoSOX Red(約5%),避免因標記導致的線粒體損傷,適合長期功能觀察。
優異的光穩定性
DASPEI抗光漂白能力強,共聚焦顯微鏡連續掃描40分鐘,熒光衰減率<15%(MitoTracker Red約25%),適合長時間延時成像(如12小時內線粒體融合與分裂的動態追蹤)。
大斯托克斯位移
DASPEI的激發/發射波長為540/570 nm(部分文獻提及461/589 nm),斯托克斯位移達128 nm,顯著高于羅丹明123(約30 nm)和JC-1(約70 nm)。大斯托克斯位移能有效避免激發光對發射熒光信號的干擾,降低背景噪音,提升成像的清晰度和信噪比(信噪比可達32:1以上),在復雜樣本(如組織切片、3D細胞球)中深層細胞信號仍清晰可辨。
多色聯用無串擾
DASPEI與綠色、藍色探針光譜分離度高,串擾率<1.5%,可構建“線粒體 + 其他靶點”的多維度體系。例如:
DASPEI(線粒體,紅色)+ FITC-Annexin V(凋亡,綠色)+ DAPI(細胞核,藍色):同步區分活細胞(高紅、無綠)、早期凋亡(低紅、弱綠)、晚期凋亡(低紅、強綠);
精子研究中:DASPEI(線粒體,紅色)+ Hoechst 33342(細胞核,藍色):同時觀察精子線粒體活性與核完整性,評估精子質量。
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