DMG-PEG 2000

MCE 國際站：DMG-PEG 2000

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-112764

CAS：160743-62-4

純度：≥98.0%

存儲條件：-20°C，密封保存，避光防潮 *溶劑中：-80°C，6個月；-20°C，1個月（密封保存，避光防潮）

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：DMG-PEG 2000 用于 siRNA 轉染 (siRNA delivery) 的脂質體的制備，能夠提高轉染效率。DMG-PEG 2000 也可被用于脂質納米顆粒制備，用于口服質粒 DNA 的體內傳遞途徑，DMG-PEG 2000 可以提高納米顆粒的黏液滲透性和傳遞效率。

生物活性：DMG-PEG 2000 用于制備用于siRNA 遞送 的脂質體，提高了體外轉染效率。 DMG-PEG 2000 還用于脂質納米顆粒，用于體內口服質粒 DNA 遞送方法，通過簡單的表面修飾提高納米顆粒的粘液滲透性和遞送效率^[1]。

體外：脂質納米粒的制備 這里我們提供了 FDA 批準的 mRNA-1273中 LNP 的脂質摩爾比。該配方中脂質的摩爾比為 SM-102：DSPC：膽固醇：DMG-PEG 2000 = 50：10：38.5：1.5[1]，RNA 與脂質的重量比為 0.05（wt/wt）。 A. 脂質混合物制備 1. 將脂質溶解在乙醇中，并制備 10 mg/m 儲備溶液。脂質儲備液可儲存在 ?20°C 下備用。 注意 1：可離子化的脂質通常是液體。由于其粘度，應始終對其進行稱重，而不是依賴自動移液器的體積。 注意 2：溶液中的膽固醇應保持溫度（>37℃）以保持流動性。及時轉移膽固醇溶液以避免冷卻。 2. 按照說明制備脂質混合物溶液。每毫升脂質混合物添加以下成分：572 µL 10mg/mL SM-102 (HY-134541)、240 µL 10mg/mL 膽固醇 (HY-N0322)、127 µL 10mg/mL DSPC (HY-W040193) 和 61 µL DMG-PEG 2000 (HY-112764)。充分混合溶液，得到澄清溶液。此混合物含有 10 mg 總脂質。注 3：脂質和比例的選擇可以根據需要進行更改，這將影響 LNP 特性（大小、多分散性和功效）和所需的 mRNA 量。B. mRNA 制備 1. 用 100 mM pH 5 醋酸鈉緩沖液制備 166.7 µg/mL mRNA 溶液。注 4：脂質：mRNA 重量比影響包封效率。其他重量比可作為替代配方制備，用戶應進行相應調整。C. 混合有三種常用方法可實現溶液的快速混合：移液器混合法、渦旋混合法和微流體混合法。所有這些混合方法都可以用于各種應用。值得注意的是，移液器混合法和渦旋混合法可能產生更不均勻的 LNP，包封效率更低，且容易發(fā)生變化。微流體裝置能夠以高度可控、可重復的方式快速混合，從而實現均勻的 LNP 和高包封效率。在這些裝置中，乙醇脂質混合物和水溶液在單獨的流中快速混合。當兩股流混合時形成 LNP，然后將其收集到單個收集管中。1. 移液器混合法：1.1。吸取 3 mL mRNA 溶液并快速將其添加到 1 mL 脂質混合溶液中（通常使用 1:3 的乙醇脂質混合物和水性緩沖液的比例。）快速上下移液 20-30 秒。1.2. 將所得溶液在室溫下孵育長達 15 分鐘。1.3. 混合后，將 LNPs 對 PBS（pH 7.4）透析 2 小時，使用 0.2 μm 過濾器進行無菌過濾，并在 4°C 下儲存。2. 渦旋混合方法：1.1. 在渦旋混合器上以中速渦旋 3 mL mRNA 溶液。然后，快速將 1 mL 脂質混合溶液加入渦旋溶液中（通常使用 1:3 的乙醇脂質混合物和水性緩沖液的比例。）。繼續(xù)渦旋所得分散體 20-30 秒。1.2將所得溶液在室溫下孵育15分鐘。 1.3. 混合后，將LNPs在PBS（pH 7.4）中透析2小時，使用0.2μm過濾器無菌過濾，并在4°C下保存。 3. 微流控混合方法： 1.1將3 mL mRNA緩沖液和1 mL脂質混合物溶液在微流控裝置中以12 mL / min的總流速混合（通常使用1：3的乙醇脂質混合物與水性緩沖液的比例）。 注5：可以改變流速比和總流速等參數來微調LNPs。 1.2. 混合后，將LNPs在PBS（pH 7.4）中透析2小時，使用0.2μm過濾器無菌過濾，并在4°C下保存。 參考文獻 1. Curr Issues Mol Biol. 2022 年 10 月 19 日；44(10):5013-5027。2. Curr Protoc. 2023;3(9):e898。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

體內：NP-3（口服給藥；每只小鼠 150 μg DNA；單劑量）在給藥后 12、24 和 36 小時腹膜內注射熒光素底物以驗證其通透性。NP-3 組在給藥后 12-24 小時內在肝臟、肺和腸道區(qū)域維持高熒光素酶表達。此外，NP-3 在口服給藥后 12 至 24 小時內的信號強度比 NP-1 或 NP-2 組高 1.5 倍[2]。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

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參考文獻：

[1]. Tianqi Nie, et al. Surface Coating Approach to Overcome Mucosal Entrapment of DNA Nanoparticles for Oral Gene Delivery of Glucagon-like Peptide 1.ACS Appl Mater Interfaces. 2019 Aug 21;11(33):29593-29603.