一、產品概述

CellFactory NIH-3T3小鼠胚胎成纖維細胞（貨號：HY-C027）是細胞生物學和分子生物學研究領域zui經典、應用zui廣泛的細胞系之一。該細胞源自NIH Swiss小鼠胚胎，具有高度的自發轉化敏感性和接觸抑制缺失特性，是研究細胞轉化、癌基因功能、DNA轉染及病毒學的理想工具。本文將詳細介紹NIH-3T3細胞的培養方法、操作要點及注意事項，助力科研人員獲得高質量的實驗數據。

二、培養前準備

1. 培養基配制

關鍵提示：NIH-3T3細胞對血清質量敏感，建議使用高質量、批次穩定的胎牛血清，以確保細胞狀態良好。

2. 培養器具準備

培養瓶：推薦使用25cm2或75cm2培養瓶

消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液

   PBS：1×磷酸鹽緩沖液，用于細胞洗滌

離心管：15mL或50mL無菌離心管

三、細胞復蘇操作

1. 標準復蘇流程

    CellFactory推薦方法：

 (1)預熱培養基：將wan全培養基置于37℃水浴鍋預熱30分鐘

 (2)取出凍存管：從液氮中取出凍存管，迅速轉移至-80℃冰箱數分鐘，讓殘余液氮揮發

 (3)快速解凍：將凍存管放入37℃水浴中快速晃動（水不能沒過蓋子），1分鐘內wan全融化

 (4)消毒轉移：用70%酒精消毒凍存管外壁，將細胞懸液轉移至含10mL預熱培養基的離心管中

 (5)離心收集：1100rpm室溫離心4分鐘

 (6)重懸接種：棄上清，用新鮮wan全培養基重懸細胞，轉移至培養瓶中培養

注意：請勿直接復蘇到T75cm2大培養瓶，建議先使用T25cm2培養瓶。

四、細胞傳代操作

1. 傳代時機

  當細胞匯合度達到80%-90%時進行傳代。NIH-3T3細胞具有接觸抑制缺失特性，可過度生長，但建議及時傳代以維持細胞狀態。

2. 傳代步驟

 (1)洗滌：吸去舊培養基，用PBS洗滌細胞1-2次，去除殘余血清

 (2)消化：加入0.25%胰蛋白酶-EDTA，37℃孵育2-3分鐘

 (3)觀察：顯微鏡下觀察到細胞變圓、間隙增大時，加入含血清培養基終止消化

 (4)收集：輕柔吹打細胞，使其wan全脫壁，轉移至離心管

 (5)離心：1100rpm室溫離心4分鐘

 (6)重懸傳代：棄上清，新鮮培養基重懸，按1:3至1:6比例傳代

關鍵要點：NIH-3T3細胞貼壁較松，消化時間不宜過長，避免過度消化損傷細胞。

五、細胞凍存操作

1. 凍存條件

2. 2. 22. 凍存步驟

 (1)選擇對數生長期、狀態良好的細胞

 (2)胰酶消化收集細胞，離心后棄上清

 (3)用預冷凍存液重懸細胞，調整密度

 (4)分裝至凍存管，標注細胞名稱、代次、日期

 (5)程序降溫盒中4℃預冷，-80℃過夜

 (6)次日轉移至液氮罐長期保存

六、培養注意事項

1. 接觸抑制缺失特性

  NIH-3T3細胞失去正常接觸抑制，可過度生長形成多層細胞。建議：

 (1)及時傳代，避免細胞過度密集

 (2)保持適宜接種密度，確保細胞均勻分布

2. 轉化敏感性

 (1)該細胞具有高度自發轉化傾向，需注意：

 (2)控制傳代次數，建議使用低代次細胞

 (3)定期觀察細胞形態，發現異常及時處理

3. 血清質量

細胞對血清批次敏感，建議：

 (1)使用同一批次血清，保持實驗條件一致

 (2)更換血清批次時，需進行細胞適應性培養

4. 無菌操作

 (1)所有操作在生物安全臺內進行

 (2)嚴格無菌操作，避免污染

 (3)定期檢測支原體，確保細胞質量

七、CellFactory質量保證

八、應用領域

CellFactory NIH-3T3細胞廣泛應用于：

 (1)細胞轉化研究：癌基因功能、抑癌基因研究

 (2)病毒學研究：逆轉錄病毒包裝、基因治療載體

 (3)分子生物學：DNA轉染、基因表達分析

 (4)藥物篩選：抗腫瘤藥物、細胞毒性評價

 (5)信號通路：生長因子信號、細胞周期調控

九、技術支持

CellFactory（西安禾洋生物科技有限公司）提供完整NIH-3T3小鼠胚胎成纖維細胞培養方案及技術指導！

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