一.名稱

英文名稱：Cy2DIGE NHS ester；Cy2DIGE SE；Cy2DIGE Osu；Cy2DIGE Succinimidyl Ester

中文名稱：Cy2DIGE NHS酯，Cy2DIGE 活性酯，Cy2DIGE 琥珀酰亞胺酯

分子量：677.5

激發(fā)波長 (Ex)：492nm

發(fā)射波長 (Em)：508nm

結(jié)構(gòu)式：

二.產(chǎn)品形式

1.固體/粉末

2.溶于大部分有機(jī)溶劑，溶于水

3.端基取代率95%+

4.避免反復(fù)凍融，避光保存，儲(chǔ)液應(yīng)該立即使用，任何未用的溶液分裝小份冷凍于 < -20°C。

三.產(chǎn)品介紹

Cy2DIGE NHS酯，即Cy2 NHS酯最小染料的等效產(chǎn)品，用于進(jìn)行DIGE分析的蛋白質(zhì)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。該染料通常作為參照染料與Cy3DIGE和/或Cy5DIGE配合使用。這三種熒光染料專為精確比較兩種或三種裂解液樣本中的蛋白質(zhì)表達(dá)而設(shè)計(jì)，其好的遷移率匹配特性與明亮的熒光信號(hào)，能夠在二維凝膠電泳中實(shí)現(xiàn)微量蛋白質(zhì)的高效檢測(cè)與高分辨率分離。

Cy2DIGE NHS ester，分子量677.50 g/mol，屬于花氰染料家族，是一種胺基反應(yīng)性熒光探針，專為雙向熒光差異凝膠電泳（2D-DIGE）設(shè)計(jì)。其激發(fā)波長最大值為492 nm，發(fā)射波長最大值為508 nm，位于綠色光譜區(qū)域。

反應(yīng)化學(xué)機(jī)制

NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）酯是該分子的反應(yīng)核心。在pH 7.2–8.5的水相緩沖液中（最佳pH為8.3–8.5），酯基與伯胺發(fā)生親核酰基取代反應(yīng)。蛋白質(zhì)上的靶點(diǎn)為賴氨酸殘基的ε-氨基和多肽鏈N端的α-氨基。伯胺的未質(zhì)子化形式進(jìn)攻酯的羰基碳，形成四面體中間體，隨后塌縮并釋放N-羥基琥珀酰亞胺，最終生成穩(wěn)定的共價(jià)酰胺鍵。

該反應(yīng)具有高度選擇性：伯胺的親核性遠(yuǎn)強(qiáng)于羥基或巰基，任何與羥基或巰基形成的酯或硫酯均不穩(wěn)定，會(huì)迅速水解或被伯胺置換。因此標(biāo)記過程干凈、定量，副產(chǎn)物極少。

NHS酯的水解與胺基反應(yīng)直接競爭。在pH 7.0、0°C條件下，水解半衰期約為4–5小時(shí)；在pH 8.6、4°C條件下，半衰期縮短至約10分鐘。這種對(duì)pH的高度敏感性要求嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，并要求每次標(biāo)記實(shí)驗(yàn)均現(xiàn)配現(xiàn)用——NHS酯類化合物在溶液中不具備長期穩(wěn)定性。

四.相關(guān)試劑

Cy3 NHS ester

Cy5 NHS ester

Cy7 NHS ester

Cy2 NHS ester

Cy4 NHS ester

Cy5.5 NHS ester

Cy7.5 NHS ester

Alexa Fluor 488 NHS ester

Alexa Fluor 555 NHS ester

Alexa Fluor 594 NHS ester

Alexa Fluor 647 NHS ester

Alexa Fluor 680 NHS ester

Alexa Fluor 750 NHS ester

ATTO 488 NHS ester

ATTO 550 NHS ester

ATTO 590 NHS ester

ATTO 647N NHS ester

ATTO 655 NHS ester

ATTO 700 NHS ester

DyLight 488 NHS ester

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