肌苷是由次黃嘌呤與核糖結合而成的核苷類化合物，臨床應用廣泛，可適用于各種原因引起的白細胞減少癥、急性及慢性肝炎或肝硬化、各種心臟疾患等。

按照《中國藥典》（2025年版）二部肌苷項目中有關物質和含量測定項下方法，篩選色譜柱進行測試。

考慮到該方法流動相條件為5%甲醇，因此選用耐100%水相的CAPCELL PAK C18 AQ和DAISOPAK SP-ODS-BP色譜柱進行分析。

在藥典條件下，2支色譜柱均能滿足藥典要求，肌苷峰與鳥苷峰分離度均在3以上，且理論塔板數均在10,000以上。

有關物質

按照有關物質項下分析條件，使用CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色譜柱分析結果如圖1、圖2所示。

系統適用性溶液中，肌苷保留時間為14.08 min，與鳥苷峰分離度4.02，能夠滿足藥典不低于3.0要求，理論塔板數11,040，滿足藥典不低于3,000要求，不對稱因子1.10，峰型良好。

圖1  系統適用性溶液分析譜圖

圖上所示數字為分離度、理論塔板數

表1  各峰積分結果表

圖2  供試品分析結果

【色譜條件】

色譜柱：CP C18 AQ S5; 4.6×250 mm

流動相：甲醇 / 水 = 5 / 95

流速：1.0 mL/min

柱溫：25 ℃

檢測：UV 248 nm

進樣量：10 μL

系統適用性溶液：按照藥典方法配置，次黃嘌呤0.5 µg/mL、鳥苷1.5 µg/mL、肌苷0.5 mg/mL （水溶）

供試品：0.5 mg/mL （水溶）

含量測定

按照含量測定項下方法，同樣能夠獲得良好分析結果，結果如圖3所示，肌苷峰形良好，不對稱因子為1.02。

圖3  含量測定分析結果

【色譜條件】

色譜柱：CP C18 AQ S5; 4.6×250 mm

流動相：甲醇 / 水 = 5 / 95

流速：1.0 mL/min

柱溫：25 ℃

檢測：UV 248 nm

進樣量：10 μL

供試品：20 μg/mL （水溶）

有關物質

按照有關物質項下分析條件，使用DAISOPAK SP-120-5-ODS-BP S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色譜柱分析結果如圖4、圖5所示。

系統適用性溶液中，肌苷保留時間為15.78 min，與鳥苷峰分離度3.98，能夠滿足藥典不低于3.0要求，理論塔板數13,328，滿足藥典不低于3000要求，不對稱因子1.11，峰型良好。

圖4  系統適用性溶液分析結果

圖上所示數字為分離度、理論塔板數

表2 積分表

圖5  供試品分析結果

【色譜條件】

色譜柱：DP SP-ODS-BP S5; 4.6×250 mm

流動相：甲醇 / 水 = 5 / 95

流速：1.0 mL/min

柱溫：25 ℃

檢測：UV 248 nm

進樣量：10 μL

系統適用性溶液：按照藥典方法配置，次黃嘌呤0.5 µg/mL、鳥苷1.5 µg/mL、肌苷0.5 mg/mL （水溶）

供試品：0.5 mg/mL （水溶）

含量測定

按照含量測定項下方法，同樣能夠獲得良好分析結果，結果如圖6所示，肌苷峰形良好，不對稱因子為1.10。

圖6  含量測定分析結果

【色譜條件】

色譜柱：DP SP-ODS-BP S5; 4.6×250 mm

流動相：甲醇 / 水 = 5 / 95

流速：1.0 mL/min

柱溫：25 ℃

檢測：UV 248 nm

進樣量：10 μL

供試品：20 μg/mL （水溶）

綜上所述，按照《中國藥典》（2025年版）二部肌苷項目中有關物質和含量測定項下方法，使用耐100%水相的CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d.×250 mm和DAISOPAK SP-120-5-ODS-BP S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色譜柱，能夠獲得良好檢測結果。