GSU細胞，人胃癌細胞 注意事項

產品名稱：GSU細胞

中文名稱：人胃癌細胞

產品貨號：ALWS-1410

產品規格：T25

品牌：HAKATA

復蘇周期：1周左右，凍存管2個工作日

細胞背景：來源于胃癌的人細胞系。從腹水中細胞建立。

細胞特性：形態：上皮細胞樣，貼壁生長。

用途：僅供科研使用。

培養條件：1） 準備 1640（推薦HAKATA A19006）培養基；優質胎牛血清(推薦HAKATA HB-FBS-500)，10%；雙抗(推薦HAKATAH8611)，1%。

2） 培養條件： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為 70%-80%。

操作步驟：

一.消毒靜置等細胞穩定后拍照 100X 和 200X。棄去培養上清，用 PBS 潤洗細胞 1-2 次并吸走。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培養瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化，一般小于 1 分鐘以內，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于 37℃培養箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養箱震蕩幫助細胞脫落，如脫落 90%以上則對應 3-6ml 含有 10%血清的培養基終止，以防胰酶殘留損傷細胞。如果貼壁非常牢固的細胞，脫落的比例比較低，也不超過 2 分鐘后終止消化，再加入 1ml 培養基讓細胞緩沖后再過2 分鐘進行二次消化，反復分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護細胞膜。或采用刮產刮細胞的方式處理也可以。總歸原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。

三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按 1:2 和以上比例進行，具體以實際細胞密度決定。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。

運輸方式：

常溫發貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養箱靜置 2-3 小時后觀察密度和狀態拍照 2-3 張反饋給銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成 1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續傳代，反復凍存 2-3 只后才擴增做實驗，以防突發情況引起斷種。

干冰發貨：常規細胞發貨凍存管 2 只，復蘇 1 只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知銷售。

生物安全：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。