CL-11細胞 操作說明書

產品名稱：CL-11細胞

中文名稱：人結腸癌細胞

細胞形態：上皮樣，貼壁細胞

傳代比例：1:2~1:3

培養體系：DMEM/F12 培養基 推薦HAKATA A19010；20%胎牛血清 推薦HAKATA HN-FBS-500；細胞培養

未加雙抗，客戶可視實際情況選擇添加

STR：Amelogenin X,Y CSF1PO 11 D2S1338 17,19 D3S1358 15,16 D5S818 12 D7S820 9(DSMZ)D8S1179 14D13S317 13,14 D16S539 11,13 D18S51 14 D19S433 14 D21S11 31,32.2 FGA 22,23 Penta

D 9,13Penta E 10,11 TH01 6,9 TPOX 8 vWA 16,17

凍存條件：凍存液：90%FBS，DMSO 10%,或使用非程序凍存液：

細胞接收：

1：觀察有無破損漏液情況 ，如有請拍照及時聯系客服。

2 ：酒精消毒培養瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態 ，觀察拍照后不用打開培養瓶蓋 ，放入培養箱靜止

2- 3小時穩定細胞狀態。

3 ：請按照細胞操作指南進行第一次傳代凍存處理。

4 ：產品隨貨會附帶細胞說明書、細胞培養操作指南、STR 鑒定、支原體檢測報告。

5 ：若產品有異?；蚱渌蓡?，可隨時聯系客服

6.收到后，培養條件(完培配置)需跟保持一致，如有變動銷售另行告知

僅限于科學研究 ，不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

細胞復蘇：

1) 準備工作：將培養液置 37℃水浴鍋預熱 30 分鐘，隨后將凍存的細胞從液氮中取出，轉移

到-80℃冰箱，放置數分鐘讓殘余液氮揮發；

2) 在超凈臺內用吸管吸取 6-7 mL 培養液至 15 mL 離心管中；

3) 將細胞從-80℃冰箱取出暫時放置于干冰里，復蘇時稍稍甩動，去除殘留的干冰和液氮，再迅速

用鑷子夾住蓋子放入 37℃水浴中快速晃動（注意：水不能沒過蓋子），使其在 1 分鐘左右

融化；

4) 在超凈臺內，用酒精棉球擦拭凍存管外壁消毒，稍稍晾干。用單道移液器將所有融化的細胞懸液

轉至提前準備好的培養液中，蓋上蓋子，1100 rpm 室溫離心 4 分鐘收集細胞；

5) 超凈臺內小心吸棄上清，用單道移液器吸取 1 mL 新鮮培養液重懸細胞至單細胞懸液，再轉

移至裝有 4 mL 培養液的 T25 cm2培養瓶 (或者 6cm 的皿) 中，寫上細胞名稱、復蘇日期、

代次，放置 37℃、5% CO2 飽和濕度培養箱內培養。

注意：請勿直接復蘇到 T75 cm2瓶或 10cm 的皿。

細胞傳代：

1) 常規細胞長至 80%-90%匯合度即可傳代。在超凈臺內把培養瓶里的培養液倒至廢液缸，用 1×PBS（T25 cm2培養瓶添加約 2~3mL，T75 cm2培養瓶約 4~5 mL）洗滌細胞 1~2 次，以去除殘余的培養液和血清（血清含有胰酶的抑制因子）；

2) 加入相應體積的胰酶溶液，具體參考附表 1，輕輕晃動瓶子并使胰酶浸過細胞，將培養瓶放入培養箱孵育 1~2 分鐘（若細胞難以消化，可適當延長孵育時間），待在顯微鏡下觀察到大部分細胞變圓不貼壁，輕輕晃動和敲擊培養瓶兩側有大量細胞脫離時，立即終止消化；

3) 加入 2 倍胰酶體積的培養液終止消化，并輕吹打細胞數次，使所有細胞脫壁；（注意：吹散細胞時注意要輕柔，盡量不產生氣泡或盡可能產生少量氣泡。）；

4) 用 10 mL 移液管轉移細胞懸液到一支 50 mL 離心管中，同一批次的細胞可以合并收集在一起，視情況用適量 PBS 將培養瓶里的殘余細胞洗下來，一起加到 50mL 離心管中。蓋上蓋子，做好標記；

5) 1100 rpm 室溫離心 4 分鐘，離心后，打開蓋子棄上清，加 2mL 培養基重懸細胞；

6) 細胞按照一定的接種比例傳代，按照 1：3 進行傳代，若細胞在兩天內長滿可增加傳代比例，若細胞生長三四天還未長滿，可適當縮小傳代比例。

細胞凍存：

1) 按細胞傳代的方法，在超凈臺內把培養瓶里的細胞進行消化至單細胞懸液，加入培養基終止反應。所有液體轉移到一支 50 mL 離心管中。

2) 用移液管吹打混合均勻，取 20 μL 進行細胞計數；

3) 1100 rpm 室溫離心 4 分鐘，離心后，打開蓋子倒去上清，用 1~2 mL 4℃預冷的凍存液重懸細胞，隨后加入凍存液調整至密度為 1x106-1x107個細胞/mL。

4) 將細胞懸液按 1 mL/管平均分裝至凍存管中，旋緊蓋子，凍存管應提前貼好細胞名稱、細胞代次、數量、凍存日期；

5) 將凍存管放置于 4℃預冷的程序降溫盒中，并在凍存結束的 15 分鐘之內將程序降溫盒放置超低溫冰箱內；

6) ge夜后，將凍存細胞轉移至液氮罐內保存。