一、產(chǎn)品概述

6-ROX 甘氨酸熒光參比液（25 µM）是一種即用型液體試劑，主要用于實時熒光定量PCR（qPCR）檢測中的熒光信號歸一化校正。6-ROX glycine *25 uM fluorescence reference solution for PCR reactions由艾美捷代理AAT Bioquest推出，貨號：AAT-395。該產(chǎn)品在 6-ROX 染料的基礎(chǔ)上通過甘氨酸修飾顯著提升了穩(wěn)定性，克服了ROX傳統(tǒng)上易講解的固有缺陷，同時完整保留了與 6-ROX 一致的光譜特性。

二、產(chǎn)品基本信息

參數(shù) | 數(shù)值

外觀 | 深紅色液體

分子量 | 591.65 Da

溶解性 | 溶于水

工作濃度 | 25 µM

激發(fā)峰 | 578 nm

發(fā)射峰 | 604 nm

儲存條件 | 冷凍（<-15°C），嚴(yán)格避光

有效期 | 收貨后 12 個月

三、配方組成與穩(wěn)定性優(yōu)化

該產(chǎn)品為即用型溶液，基質(zhì)配方如下：

組分 | 濃度/含量 | 作用

6-ROX 甘氨酸 | 25 µM | 熒光參比染料

Tris | 20 mM（pH 8.4） | 緩沖體系

EDTA | 0.1 mM | 螯合金屬離子，保護(hù)核酸

Tween® 20 | 0.01% | 非離子表面活性劑，減少吸附

穩(wěn)定性突破：傳統(tǒng) 6-ROX在羅丹明家族中極不穩(wěn)定，而該產(chǎn)品的甘氨酸修飾形式顯著改善了這一短板--有效期從常規(guī) 6-ROX SE 的 6 個月延長至 12 個月，切以水溶性液體制劑形式提供，無需復(fù)溶，開蓋即用，簡化了操作流程并降低了因復(fù)溶操作引入的誤差風(fēng)險。

四、qPCR 參比原理

在 qPCR 實驗中，不同反應(yīng)孔之間因蒸發(fā)，加樣體積差異或儀器光路偏差等因素，會導(dǎo)致熒光信號讀數(shù)的孔間波動。6-ROX甘氨酸作為被動參比染料（Passive Reference Dye），其自身熒光信號不參與靶標(biāo)擴(kuò)增檢測，而是作為每個反應(yīng)孔的內(nèi)參信號。儀器通過計算“靶標(biāo)熒光強(qiáng)度 / ROX 熒光強(qiáng)度"的比值，對每個孔進(jìn)行獨立校正，從而消除非生物學(xué)因素的干擾，使不同孔之間的ct值更具可比性，顯著提升數(shù)據(jù)精度。

五、操作注意事項

1. 使用前充分混勻，避免氣泡產(chǎn)生

2. 按儀器廠商推薦的終濃度添加至 qPCR 反應(yīng)體系中（不同品牌儀器對 ROX 濃度要求不同，需根據(jù)說明書調(diào)整）

3. 儲存于 -15°C 以下，避免反復(fù)凍融；建議分裝后單次使用

4. 操作過程中注意避光，防止光漂白

綜上，6-ROX 甘氨酸熒光參比液以其即用型配方、延長的穩(wěn)定性和完整保留的光譜特性，為 qPCR 實驗提供了一種更可靠的信號校正解決方案，尤其適用于對數(shù)據(jù)重復(fù)性要求較高的高通量檢測場景。

文獻(xiàn)參考：

Four-color DNA sequencing by synthesis on a chip using photocleavable fluorescent nucleotides

Authors: Seo TS, Bai X, Kim DH, Meng Q, Shi S, Ruparel H, Li Z, Turro NJ, Ju J.

Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2005): 5926

Evaluation of surface-enhanced resonance Raman scattering for quantitative DNA analysis

Authors: Faulds K, Smith WE, Graham D.

Journal: Anal Chem (2004): 412

Photocleavable fluorescent nucleotides for DNA sequencing on a chip constructed by site-specific coupling chemistry

Authors: Seo TS, Bai X, Ruparel H, Li Z, Turro NJ, Ju J.

Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2004): 5488

Adsorption of oligonucleotides on PMMA/PNIPAM core-shell latexes: polarity of the PNIPAM shell probed by fluorescence

Authors: Prazeres TJ, Santos AM, Martinho JM, Elaissari A, Pichot C.

Journal: Langmuir (2004): 6834

Blue light-induced generation of reactive oxygen species in photoreceptor ellipsoids requires mitochondrial electron transport

Authors: Yang JH, Basinger SF, Gross RL, Wu SM.

Journal: Invest Ophthalmol Vis Sci (2003): 1312