產品概述

由艾美捷代理Agrisera推出的抗KLH（鑰孔血藍蛋白）抗體（貨號：AS99 001）是一款兔源多克隆抗體，免疫原為純化的完整鑰孔血藍蛋白（KLH）分子。抗體經免疫原親和純化，以凍干形式提供于PBS pH 7.4緩沖體系中，每支規格為50 µg。推薦復溶體積為50 µl無菌水，復溶后濃度約為1 µg/µl。建議分裝保存于-20°C，避免反復凍融；開蓋前請短暫離心，以防管壁或管蓋附著的樣本損失。

分子量與識別特性

參數 | 數值/說明

亞基分子量 | 約400 kDa

全分子聚集態 | 高分子量多聚體（SDS-PAGE分離困難）

免疫原 | 天然全長KLH（來源：*Megathura crenulata*）

物種反應性 | 已確認對*Megathura crenulata* KLH有效，無已知非反應性物種

推薦應用與稀釋比例

應用 | 推薦稀釋度

ELISA | 1 : 10 000

蛋白質印跡（WB） | 1 : 10 000

免疫定位（IL） | 1 : 1000

載體蛋白背景與常見用途

KLH是一種存在于海洋軟體動物*Megathura crenulata*血淋巴中的含銅呼吸蛋白，由分子量約400 kDa的亞基組裝而成。因其具有多個賴氨酸殘基可供肽段偶聯，且具備強免疫刺激性（可激活T細胞、單核細胞、巨噬細胞及多形核淋巴細胞），KLH被廣泛用作多肽/半抗原的載體蛋白，用于制備針對小分子抗原（如磷酸化肽段、激素片段、毒素表位）的多克隆抗體。

核心功能定位：實驗對照工具

本抗體的核心價值并非直接檢測目標蛋白，而在于作為技術對照工具，服務于以下三類實驗場景：

1. 特異性排除對照（排除抗載體背景信號）

在使用KLH偶聯多肽免疫動物制備抗體的實驗中，最終獲得的抗血清中往往同時存在兩類抗體：

針對目標多肽序列的抗體（特異性抗體）；

針對KLH載體蛋白本身的抗體（非特異性背景抗體）。

當此類抗血清用于免疫定位（IL）或WB實驗出現陽性信號時，無法區分該信號源于目標表位識別還是KLH載體識別。本抗體可作為平行對照：

在相同實驗條件下，使用AS99 001替代抗目標多肽抗體進行檢測；

若信號再次出現，則證明原抗體中的陽性信號可能部分或全部源于抗KLH成分的干擾；

若AS99 001無信號，則目標信號可歸因于特異性抗肽段抗體。

2. 偶聯效率驗證（ELISA平臺）

在KLH-多肽偶聯物的質量控制中，可用AS99 001通過ELISA檢測偶聯物板上是否成功包被了KLH載體，從而間接評估偶聯反應是否成功或包被步驟是否有效。

3. 組織內源交叉反應預警（植物維管組織）

根據H?glund等（2002）的研究報道，植物維管組織（木質部及維管形成層）中存在可被抗KLH抗體識別的內源性抗原。這一發現對使用KLH偶聯抗原制備的抗體開展植物免疫定位實驗具有重要的警示意義：

即使目標抗原本身并非KLH，實驗過程中仍可能因植物組織內源交叉反應性物質而產生假陽性信號；

建議在植物IL實驗中，始終將AS99 001作為陰性對照抗體進行平行染色，以評估維管組織背景信號的真實來源。

實驗操作注意事項

1. SDS-PAGE遷移特性：KLH亞基分子量約400 kDa，且易形成高分子量聚集體，在常規SDS-PAGE體系中難以有效分離并轉印至膜上。建議使用低濃度凝膠（如6%）或采用Native-PAGE進行檢測；若WB信號較弱或條帶彌散，屬正常現象。

2. 稀釋度優化：作為高親和力純化抗體，推薦ELISA和WB的起始稀釋度為1:10 000，可根據具體試劑盒或樣本類型上下浮動2–4倍。

3. 陽性對照：建議使用商品化純化KLH蛋白直接包被ELISA板或作為WB樣本，以驗證抗體活性。

4. 儲存：凍干及復溶后均建議于-20°C保存，避免4°C長期存放。

應用場景總結

場景 | 用途

抗KLH偶聯多肽抗體的質控 | 鑒定抗血清中是否存在抗KLH背景組分

植物組織IL實驗 | 作為陰性對照排除維管組織交叉反應

KLH-多肽偶聯效率評估 | ELISA檢測偶聯物中KLH載體的存在

抗體制備工藝監測 | 評估純化過程是否有效去除抗KLH抗體

總結

AS99 001是專為使用KLH載體系統的抗體研究者設計的技術對照工具。其核心價值不在于對目標蛋白的檢測，而在于：

提供明確的背景信號來源判定依據；

預警植物免疫定位實驗中的維管組織假陽性風險；

支持偶聯物質量控制的ELISA檢測。

在任何使用KLH偶聯抗原制備抗體的實驗中，建議將AS99 001納入對照體系，以提升數據解釋的嚴謹性。如需詳細實驗方案或特殊應用咨詢，請參考完整產品說明書或聯系技術支持團隊。

引用文獻：

Geadkaew et al. (2014). Bi-functionality of Opisthorchis viverrini aquaporins. doi:10.1016/j.biochi.2014.11.013.

H?glund et al. (2002). An Antigen Expressed During Plant Vascular Development Crossreacts with Antibodies Towards KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin). J of Histochem & Cytochem. 50:999-1003.