一、產品概述

由艾美捷代理Bethyl推出的兔抗人磷酸化KAP-1（S824）多克隆抗體（貨號：A300-767A），特異性識別KAP-1（KRAB相關蛋白1，亦稱TRIM28）在絲氨酸824位點的磷酸化修飾。KAP-1作為KRAB鋅指轉錄抑制因子的核心共抑制因子，在染色質重塑，轉錄調控及DNA損傷應答中發揮關鍵作用，其S824磷酸化是ATM/ATR介導的DNA損傷信號通路的重要標志事件。該抗體經嚴格驗證，適用于免疫細胞化學，免疫熒光，免疫組織化學，免疫沉淀以及蛋白免疫印跡等多種應用，是研究轉錄調控與基因組穩定性維持機制的多功能工具。

二、產品規格與質量參數

項目 | 規格

靶標| KAP-1 磷酸化（Ser824）

驗證種屬| 小鼠、人類

宿主/克隆性| 兔多克隆（Whole IgG）

免疫原| 人KAP-1蛋白（NP_005753.1）第824位磷酸化絲氨酸周圍序列對應的合成磷酸化肽段

純化方式| 抗原親和純化（固定化磷酸化表位特異性支持物）

濃度| 200 µg/mL（A280法測定，1 mg/mL IgG吸光系數1.4）

緩沖體系| Tris緩沖生理鹽水（TBS），含0.1% BSA（穩定劑）及0.09%疊d化鈉（防腐劑）

儲存條件| 2~8°C（請勿冷凍）

有效期| 自收貨之日起1年

三、應用與推薦稀釋比例

應用體系 | 推薦稀釋/使用濃度 | 關鍵操作備注

免疫細胞化學（ICC）| 1:200 ~ 1:1,000 | 適用于固定細胞的常規免疫染色

免疫細胞化學/免疫熒光（ICC-IF）| 1:200 ~ 1:1,000 | 適用于熒光標記的免疫細胞染色

免疫組織化學（IHC）| 1:100 ~ 1:500 | 推薦使用檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復（適用于FFPE切片）

免疫沉淀（IP）| 6 µg/mg 總蛋白裂解液 | 每mg裂解物使用6 µg抗體

蛋白免疫印跡（WB）| 1:2,000 ~ 1:10,000 | 封閉液/抗體稀釋液：5% Milk-TBST；一抗孵育過夜（4°C）

WB（細胞裂解液直接檢測）| 按WB范圍 | 二抗推薦抗兔IgG重+輕鏈抗體（如A120-101P）

WB（IP后檢測）| 按WB范圍 | 二抗推薦抗兔lgG輕鏈HRP偶聯物，封閉液中加5%正常豬血清以減少重鏈干擾

四、靶點生物學背景

KAP-1（KRAB相關蛋白1，基因名TRIM28）屬于TRIM/RBCC家族成員，包含RING指結構域、B-box結構域及α螺旋卷曲螺旋區，作為多功能支架蛋白參與多個關鍵生物學過程：

轉錄共抑制：KAP-1通過與KRAB鋅指轉錄抑制因子的KRAB結構域互作，招募組蛋白修飾酶及染色質重塑復合物（如NuRD、SETDB1等），介導基因沉默

DNA損傷應答：在DNA雙鏈斷裂發生后，KAP-1的S824位點被ATM/ATR激酶磷酸化，該磷酸化事件時染色質松弛和損傷信號傳遞的重要步驟，參與調節下游修復蛋白的可及性

SUMO化與泛素化調控：KAP-1兼具E3 SUMO連接酶和E3泛素連接酶活性，通過其RING結構域介導底物修飾，參與多種細胞應激響應。

五、別名

E3 SUMO-protein ligase TRIM28；KAP1；KAP-1；KRAB [Kruppel-associated box domain]-associated protein 1；KRAB-associated protein 1；KRAB-interacting protein 1；KRIP-1；nuclear corepressor KAP-1；PPP1R157；protein phosphatase 1, regulatory subunit 157；RING finger protein 96；RING-type E3 ubiquitin transferase TIF1-beta；RNF96；TF1B；TIF1B；TIF1-beta；transcription intermediary factor 1-beta；transcriptional intermediary factor 1-beta；Tripartite motif-containing protein 28

六、使用與儲存注意事項

避免反復凍融：本品為液體形式，請于2~8°C持續保存，切勿冷凍

防腐劑提示：緩沖液含0.09%疊d化鈉，進行活細胞實驗或體內應用前請透析去除

磷酸化信號檢測要帶你：樣本制備時推薦添加磷酸酶抑制劑（如Na?VO?、β-甘油磷酸鹽）以維持磷酸化狀態；A824磷酸化在DNA損傷誘導后迅速升高，建議使用電離輻射（如γ射線）或化療藥物（如喜樹堿、依托泊苷）處理的細胞作為陽性對照

多應用兼容型提示：本品已在ICC-IF、IHC、IP及WB多個平臺完成驗證，建議各應用s次使用時在推薦范圍內進行梯度優化

分子量提示：KAP-1分子量約為88~100 kDa，磷酸化修飾可能導致WB條帶遷移率變化。

*本手冊信息基于出廠批次驗證數據，具體實驗條件可能因樣本類型及實驗室環境而異，建議用戶根據實際體系進行預實驗優化。