一、產品基本規格

項目 | 規格

靶標| RbBP5（視網膜母細胞瘤結合蛋白5）

驗證反應種屬| 小鼠、人

適用應用| ChIP、ChIP-chip、ChIP-Seq、ICC、IHC、IP、WB

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗體形式| 完整IgG

免疫原| 人RbBP5蛋白第488位至C末端區域

同種型| IgG

標記類型| 未偶聯（Unconjugated）

純度| 抗原親和純化

抗原種屬來源| 人

工作濃度| 1000 µg/ml

儲存條件| 2 - 8 °C

有效期| 自收貨之日起1年

緩沖體系| Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊d化鈉

二、產品制備與質量控制

本抗體由艾美捷代理Bethyl推出，貨號：A300-109A，采用抗原親和純化工藝制備，具體流程與質控參數如下：

親和純化：使用固相載體上固定的RbBP5特異性表位肽段進行親和層析，確保高特異性識別RbBP5蛋白。

表位定位：識別表位對應于人RbBP5（retinoblastoma binding protein 5）第500位至C末端（第538位）之間的區域，參考序列編號NP_005048.2（GeneID 5929）。

濃度測定：免疫球蛋白濃度通過比爾定律確定，以1 mg/mL IgG在A280波長下吸光度為1.4作為換算基準。

三、靶標生物學信息

RbBP5（視網膜母細胞瘤結合蛋白5）是人源Set1樣組蛋白甲基轉移酶（HMT）復合物的核心亞基之一。該復合物負責組蛋白H3第4位賴氨酸（H3K4）的單甲基化，二甲基化和三甲基化修飾，是表觀遺傳調控網絡中的關鍵節點。

RbBP5參與組裝多種Set1樣復合物，這些復合物包含不同的組分組合，涵蓋以下蛋白成員：MLL、MLL2、MLL3、MLL4、ASH2L、WDR5、hDPY-30、hSwd2、CXXC1、HCF1、Menin、PTIP、PA1、NCOA6及UTX。通過這些多樣化的復合物，RbBP5在基因轉錄激活、發育調控及細胞命運決定中發揮廣泛作用。此外，RbBP5也是眾多能與視網膜母細胞瘤腫瘤抑制蛋白（pRb）結合的蛋白之一，提示其在細胞周期調控與腫瘤抑制通路中亦具有潛在功能。

四、推薦實驗條件與操作要點

以下為各應用場景的推薦稀釋比例及關鍵操作參數，供實驗設計參考。

1. 染色質免疫沉淀（ChIP）及衍生應用

ChIP：推薦用量1 ~ 3 µg/反應，參考文獻Dou等（Nat Struct Mol Biol, 2006）。該抗體的既往批次已在ChIP應用中驗證有效。

ChIP-chip：推薦用量10 µg/反應。

ChIP-Seq：推薦用量2 µg/反應。

適用范圍：適用于組蛋白H3K4甲基轉移酶復合物在基因組范圍的靶標定位分析，以及特定基因啟動子區域RbBP5占位研究。

2. 免疫細胞化學（ICC）

推薦稀釋比：1:250 ~ 1:1,000

適用范圍：培養細胞中RbBP5蛋白的原位定位與表達分析。

3. 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:500 ~ 1:2,000

抗原修復：推薦使用pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復（HIER），適用于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片。

適用范圍：組織切片中RbBP5表達水平的原位檢測。

4. 免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg抗體/毫克蛋白裂解液

適用范圍：細胞裂解液中RbBP5蛋白的富集，適用于蛋白質互作分析或下游WB檢測。

操作建議：建議使用Protein A瓊脂糖珠進行免疫復合物捕獲；沉淀前建議進行預清除（Pre-clearing）步驟以降低非特異性結合。

5. 蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋比：1:10,000 ~ 1:25,000

封閉與稀釋液：5% Milk-TBST

一抗孵育：推薦4°C孵育過夜。

二抗選擇：

-細胞裂解液WB：推薦使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（如A120-101P）。

-免疫沉淀物WB：推薦使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（Cat. No. S100-020），以有效降低重鏈交叉反應的干擾。

6. 通用操作注意事項

陽性對照：推薦使用HeLa、293T等表達RbBP5水平較高的細胞系裂解液作為WB陽性對照；ChIP實驗建議使用已知RbBP5靶基因位點作為陽性對照。

疊氮化物注意事項：緩沖液含0.09%疊d化鈉，若后續IP洗脫或WB檢測涉及HRP體系，需注意疊氮化物對HRP活性的抑制。

五、儲存與穩定性

儲存條件：2 ~ 8°C冷藏保存，嚴禁冷凍。

有效期：自收貨之日起1年內保持穩定。

分裝建議：如需長期使用，建議按單次用量分裝后儲存于2 ~ 8°C，避免反復取用。