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實驗方法原理胰蛋白酶消化后，用EDTA分散從皮膚片分離的表皮片，然后用添加bFGF（FGF-2）的無血清培養液培養。實驗材料D-PBSA胎牛血清大豆胰蛋白酶抑制劑試劑、試劑盒添加激素的黑素細胞培養液胰蛋白酶和EDTA混合液儀器、耗材組織培養皿吸管離心管濕潤的培養箱水浴箱電子細胞計數儀或血細胞計數板實驗步驟原代培養第1天1.用70%乙醇浸洗皮膚標本，然后用D-PBSA浸洗2次。2.將組織移入無菌100mm培養皿，表皮面朝下。3.用解剖剪除去皮下脂肪和深部。4.將剩余的組織用手術刀切成2mm×2mm
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人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗實驗步驟2.3小鼠胚胎飼養細胞（MEF)的制備廣泛地用于支持hES的伺養層細胞來自小鼠胚胎[丁]^〇1113〇1161&1,，1998;Reu-binoffetal.，2000]，如小鼠胚胎飼養細胞（MEFs)，盡管它們可能是原始的間葉細胞的前體細胞。每一種hES細胞系在不同的詞養層細胞上的生長可能不同，這點要注意，對于率的增殖有些飼養層細胞比另外一些細胞更合適，通常要傳5?10代以確保細胞適應于新的伺養細胞。始終要做到只要細胞培養標準條件改變，就要對細胞的核型穩定
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實驗材料母鼠試劑、試劑盒BSS儀器、耗材無菌器械顯微鏡實驗步驟1.殺死懷孕18天母鼠（常用過量CO2使其窒息），用無菌器械取出胚胎，放在無菌的培養皿中。2.取下胚胎的頭，放在盛有4ml不含Ca2+和Mg2+的平衡鹽溶液（BSS）的培養皿中。3.從頭顱骨上取下腦，放在35mm培養皿中的BSS液滴上，培養皿中半裝滿Paraplast（Sigma）。4.在顯微鏡下剝離腦膜，取下海馬體，放在裝有BSS的35mm培養皿中。5.海馬體在新鮮配制的0.25%胰酶BSS溶液中37℃孵育15分鐘。6.小心吸掉胰酶
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神經細胞原代培養實驗實驗方法原理神經細胞的原代培養是盡量創造適合于各類神經細胞生長的體外環境，獲得狀態良好，純度較高細胞的方法。腦部組織來源的各種神經細胞的培養具有相似的取材過程和部分通用的培養條件。實驗材料動物組織試劑、試劑盒消化液(0.25%胰蛋白酶+O.04%的EDTA)*培養基(DMEM+10%胎牛血清＋雙抗）D-PBS液多聚賴氨酸（包被濃度1OOµgml)滅菌超純水殯伏75%酒精儀器、耗材體視顯微鏡相差顯微鏡精細器械（彎鑷、直鑷、虹膜剪、75%酒精消毒）眼科器械（彎鑷、直鑷、剪刀共3套
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小鼠胚胎干細胞培養實驗實驗方法原理胚胎干細胞在體內外可以分化為各種類型的細胞。我們的體外分化方法有利于神經前體細胞通過在少量的培養基內選擇（第3步），在有bFGF存在的情況下擴增（第4步）并終分化在第5步。細胞全程培養在37℃，5％CO2，100％濕度條件下。一般體外誘導向神經細胞方向分化，也可以采用低濃度的RA進行誘導。實驗材料小鼠試劑、試劑盒明膠PBSDMEM馬血清L-谷氨酰胺HEPESβ-巰基乙醇PESTLIF儀器、耗材培養板離心管水浴鍋離心機6孔板24孔板實驗步驟一、ES培養基在LIF存
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角膜上皮細胞培養實驗實驗方法原理將角膜組織置于膠原蛋白上，使其附著。然后，在涂有纖連蛋白和膠原蛋白的培養皿擴增培養。試劑、試劑盒D-PBSA無血清角質形成細胞培養液胰蛋白酶EDTABiocoat6孔培養板實驗步驟一、材料滅菌無血清角質形成細胞培養液（keratinocyteserum-freemedium，KGM;Clonetics):含有0.15mmol/LCa2-、0.1ng/ml人上皮生長因子、5ug/ml胰島素、0.5ug/ml30ug/ml牛垂體提取物。EMEM(Eagle'smini
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小鼠胚成纖維細胞的培養和體外分化實驗材料母鼠試劑、試劑盒PBS胰蛋白酶溶液DNase溶液儀器、耗材無菌解剖器械不銹鋼濾網燒瓶培養箱實驗步驟1.準備下列試劑和材料：確定懷孕期的母鼠（孕期14至6天）無菌解剖器械（鑷子、剪刀、手術刀片）Cellector帶收集裝置的不銹鋼濾網，1mm直徑篩網內有攪拌棒的125ml無菌的胰蛋白酶消化的燒瓶有攪拌盤的培養箱無Ca2+和Mg2+的PBS胰蛋白酶溶液DNase溶液（10mg/ml）MEF生長培養基MEF凍存培養基150mm和100mm組織培養皿2ml冷凍管2
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小鼠肝細胞培養實驗實驗方法原理直接從生物體內獲取組織細胞進行的培養稱為原代細胞培養。原代培養是建立各種細胞系的步，是從事培養工作的人員應熟悉和掌握的基本的技術。根據培養方法不同分為組織塊培養法和單層細胞培養法。實驗材料小鼠試劑、試劑盒DMEMDMEM胰酶PBS儀器、耗材飯盒紗布小剪子小鑷子大鑷子大燒杯平皿研磨玻片濾網離心管6孔培養板吸管移液管手套微量加樣器實驗步驟一、實驗步驟1.將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。2.剔除脂肪、結締組織、血液等雜物，轉移到另
