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在棉花遺傳轉(zhuǎn)化與功能基因組學(xué)研究中,轉(zhuǎn)基因植株及體細(xì)胞胚胎的高效篩選一直是影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)篩選多依賴抗生素/除草劑抗性標(biāo)記或GUS組織化學(xué)染色,存在周期長、破壞樣本、難以活體動態(tài)觀察等局限。綠色熒光蛋白(GFP)及多色熒光蛋白報告系統(tǒng)的引入,為棉花轉(zhuǎn)化事件快速判定、目的基因可視化追蹤提供了非破壞性的活體檢測手段。
近期,河南大學(xué)研究團(tuán)隊在《Frontiers in Plant Science》(2022)發(fā)表研究,系統(tǒng)優(yōu)化了適用于棉花組織的熒光蛋白報告系統(tǒng),并明確提到利用LUYOR-3415RG手持式熒光蛋白激發(fā)光源對轉(zhuǎn)基因棉花樣品進(jìn)行活體熒光觀察與快速分選。該研究選取了涵蓋綠色(sfGFP、Clover、EYFP、YPet、mVenus)、紅色(mCherry、tdTomato)、黃色(mVenus/YPet類)及青色(mCerulean、ECFP)等11種熒光蛋白,在棉花愈傷組織、體細(xì)胞胚胎及不同器官中表達(dá)驗(yàn)證,其中9種在轉(zhuǎn)基因材料中可穩(wěn)定、強(qiáng)效表達(dá)并遺傳。
在具體觀測環(huán)節(jié),大于約2 cm2的轉(zhuǎn)基因棉花組織(愈傷、胚胎、葉片、種子、根等)可直接使用LUYOR-3415RG進(jìn)行激發(fā):儀器提供適配GFP/eGFP的藍(lán)光波段與適配RFP(如mCherry、tdTomato)的綠光/黃光波段,配合相應(yīng)熒光觀察濾光附件(如LUV-495A、LUV-590A等),可在無需暗室條件下快速識別陽性信號,并對群體材料進(jìn)行高通量初篩。該方法尤其適合:
轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞胚胎與抗性愈傷的早期陽性判定;
成熟轉(zhuǎn)基因棉花各器官(葉、根、纖維、花器)的功能基因表達(dá)可視化;
亞細(xì)胞定位研究中,對較大組織塊或活體材料的快速核查。
所以,借助多色熒光蛋白報告系統(tǒng)與手持式熒光蛋白激發(fā)光源,棉花遺傳轉(zhuǎn)化過程中的“陽性事件識別—功能基因標(biāo)記—活體動態(tài)觀察"可更高效銜接,有助于提升體細(xì)胞胚胎利用率與后續(xù)表型分析效率。
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