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GFP和EGFP分不清楚？今天小編將為大家詳細講解GFP和EGFP的相同和不同之處，以及如何快速觀察熒光表達！

GFP綠色熒光蛋白

GFP綠色熒光蛋白，英文全稱Green Fluorescent Protein，是一種在藍光或紫外光激發后發出綠色熒光的蛋白質。

GFP天然存在于維多利亞多管發光水母中，所以也稱為野生型GFP。

GFP由238個氨基酸組成。GFP的大小為26.9kDa。GFP因其固有熒光而無需任何輔助分子，是分子生物學中的強工具。熒光是由于蛋白質的連續氨基酸的共價重排而產生的。蛋白質折疊后，主鏈原子Ser65、Tyr66和Gly67在O2存在下形成高度共軛的平面對羥基苯亞甲基咪唑啉酮發色團。晶體結構研究表明，發色團堆積在分子β桶結構的核心內，可防止其因順磁性氧、水偶極子或順反異構化而猝滅。此外，發色團與鄰近分子的非共價相互作用增強了其光譜特性。

EGFP增強型綠色熒光蛋白

EGFP增強型綠色熒光蛋白，英文全稱Enhanced Green Fluorescent Protein，是野生型GFP的變體。

EGFP具有比GFP更高的發射強度。F64L和S65T這兩個突變生成的EGFP在37°C下具有更高的折疊效率。EGFP在490nm處具有單個激發峰，這是由于S65T抑制了395nm峰，因為它調節附近Glu222的電離態。另一方面，F64L提高了37℃下的折疊效率。重要的是，EGFP的密碼子序列針對在哺乳動物細胞中的表達進行了優化。

GFP和EGFP的區別

GFP和EGFP的相同之處：

1. GFP和EGFP都屬于綠色熒光蛋白，激發后都會發出綠色熒光。

2. GFP和EGFP不需要任何輔助酶/底物、輔因子或基因產物來顯示其顏色。因此，兩者都被用作分子生物學中基因表達的報告基因。

3. GFP和EGFP與發色團形成經典的β-桶狀折疊，包含穿過結構核心的螺旋。

GFP和EGFP的區別：

1. GFP激發光峰值395nm，EGFP激發光峰值488nm。

2. GFP和EGFP被激發后都會發出綠色熒光，但是EGFP的綠色熒光更亮。

3. GFP是從維多利亞水母中分離出來的野生型蛋白質，EGFP是野生型GFP的變體。

如何快速觀察GFP和EGFP？

如果同學們想看GFP或EGFP的綠色熒光表達，需要用相應波長的激發光照射含GFP或EGFP的樣本：

• 觀察GFP用紫外光照射

• 觀察EGFP用藍光照射

下圖是LUYOR-3280RB藍光手電筒照射含GFP的煙草葉片后，觀察到的綠色熒光。

使用3280熒光手電筒僅需2步就可快速觀察熒光表達：

第一步：戴上熒光觀察眼鏡

第二步：打開手電筒，照射樣本，就可以直接看到熒光啦！

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