很多同學覺得GFP和EGFP、avGFP都是綠色熒光蛋白,激發波長應該都一樣,用便攜式熒光蛋白激發光源的450nm波段去觀察GFP的表達,但有時候無法看到gfp的熒光表達,不知道是設備原因還是沒有表達成功。
大家在觀察熒光蛋白表達之前,一定要看自己質粒圖譜用的到底是哪種GFP,如果是GFP、wtGFP、avGFP必須用紫外光源去激發(365nm波段,LUYOR-3280UV),如果的eGFP、mEGFP那要藍光波段(450nm LUYOR-3280RB)去激發。
下面是幾種綠色熒光蛋白的激發波長和發射波長圖譜:
GFP又名 wtGFP, avGFP, gfp10, 綠色熒光蛋白
GFP綠色熒光蛋白是一種基本的(構成熒光的)長斯托克斯位移熒光蛋白,發表于1992年,來源于Aequorea victoria。它對酸的敏感性低。GFP激發光的波長是395nm,mEGFP發射光的波長是509nm。

圖一:wtGFP, avGFP熒光蛋白的激發光和發射光
EGFP又名增強型GFP,GFPmut1
EGFP綠色熒光蛋白是1996年發表的一種堿性(構成性熒光)綠色熒光蛋白,來源于Aequorea victoria。據報道,它是一種快速成熟的弱二聚體,具有中等酸敏感性。mEGFP激發光的波長是488nm,mEGFP發射光的波長是507nm

圖二:eGFP熒光蛋白的激發光和發射光
mEGFP綠色熒光蛋白
mEGFP綠色熒光蛋白是2002年發表的一種堿性(構成性熒光)綠色熒光蛋白,來源于Aequorea victoria。它具有中等酸敏感性。mEGFP激發光的波長是488nm,mEGFP發射光的波長是507nm。

圖三:mEGFP熒光蛋白的激發光和發射光
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圖五:GFP在水稻種子上的表達
綠色熒光蛋白的激發和發射波長

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