Biotin Azide Plus（疊氮生物素Plus），是集成銅螯合系統(tǒng)、親水PEG間隔、生物素親和標(biāo)簽與疊氮點(diǎn)擊基團(tuán)的新一代多功能生物素化探針。核心突破在于分子內(nèi)自帶銅催化單元，無(wú)需額外添加銅離子即可高效驅(qū)動(dòng)CuAAC反應(yīng)，兼具高反應(yīng)活性、低毒性、高水溶性、強(qiáng)特異性，是低豐度蛋白/糖蛋白標(biāo)記、點(diǎn)擊化學(xué)偶聯(lián)、鏈霉親和素富集、蛋白質(zhì)組學(xué)分析的工具試劑。

一、基礎(chǔ)信息

中文名稱：疊氮生物素Plus；生物素-PEG-疊氮（自螯合銅型）

英文名稱：Biotin Azide Plus；Biotin-PEG-Azide（Cu-chelating）

CAS號(hào)：2669097-31-6

分子式：C??H??N??O?S

分子量：582.72

外觀：白色至類白色粉末

純度：≥95%（HPLC），規(guī)格≥98%

溶解性：易溶于DMSO、DMF、甲醇；水溶性良好（PEG間隔鏈）

儲(chǔ)存條件：-20℃密封、避光、干燥保存；溶液現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍融

核心定位：自催化點(diǎn)擊探針、低豐度生物分子標(biāo)記、生物素化偶聯(lián)、親和純化、高靈敏度成像

二、分子結(jié)構(gòu)與創(chuàng)新設(shè)計(jì)

Biotin Azide Plus為模塊化四嵌段結(jié)構(gòu)，四大功能單元協(xié)同，實(shí)現(xiàn)“反應(yīng)-催化-親和-水溶性"一體化，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)Biotin-Azide。

1. 生物素端（Biotin）

功能：高特異性親和標(biāo)簽，與**鏈霉親和素（Streptavidin）/親和素（Avidin）**結(jié)合（Kd≈10?1? M）

作用：標(biāo)記后可通過鏈霉親和素磁珠/樹脂高效富集目標(biāo)分子，或用于熒光/酶聯(lián)檢測(cè)

2. 親水PEG間隔鏈

組成：短鏈PEG（乙二醇單元）

功能：提升水溶性、降低空間位阻、減少非特異吸附、增強(qiáng)柔性，確保生物素與鏈霉親和素?zé)o障礙結(jié)合

3. 自螯合銅系統(tǒng)（核心創(chuàng)新）

結(jié)構(gòu)：分子內(nèi)集成多齒銅螯合配體（如三氮唑/胺基組合）

機(jī)制：可自發(fā)結(jié)合溶液中微量銅離子，形成高活性銅配合物，**無(wú)需額外加Cu?/Cu2?**即可催化CuAAC反應(yīng)

優(yōu)勢(shì)：降低銅毒性、減少試劑用量、簡(jiǎn)化操作、提升生物相容性

4. 疊氮端（-N?）

活性：高特異性點(diǎn)擊反應(yīng)基團(tuán)

核心反應(yīng)：

CuAAC（銅催化疊氮-炔環(huán)加成）：與**炔烴（Alkyne）**生成穩(wěn)定三唑環(huán)；

SPAAC（無(wú)銅點(diǎn)擊）：與DBCO/BCN直接反應(yīng)，無(wú)需銅催化

三、核心優(yōu)勢(shì)（對(duì)比傳統(tǒng)Biotin-Azide）

1. 自催化革命：無(wú)需額外銅，低毒高效

vs 傳統(tǒng)Biotin-Azide：傳統(tǒng)需外加銅離子（CuSO?+抗壞血酸鈉），易導(dǎo)致蛋白變性、細(xì)胞毒性、背景干擾；

Biotin Azide Plus：分子內(nèi)自帶銅螯合系統(tǒng)，僅需微量?jī)?nèi)源銅即可催化，毒性極低、生物兼容、背景干凈。

2. 超高反應(yīng)活性：稀溶液中極速反應(yīng)

自螯合銅配合物活性，稀釋條件下（nM–μM）仍可瞬時(shí)反應(yīng)，二級(jí)速率常數(shù)提升10–100倍；

適配低豐度蛋白、痕量代謝物、微量核酸的高效標(biāo)記，信噪比（S/N）顯著提升。

3. 水溶性與穩(wěn)定性雙優(yōu)

PEG間隔鏈增強(qiáng)水溶性，可直接在PBS/緩沖液中反應(yīng)，無(wú)需高比例有機(jī)溶劑；

分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，疊氮與生物素不易水解，儲(chǔ)存期長(zhǎng)、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好。

4. 雙點(diǎn)擊模式：兼容CuAAC與SPAAC

既可自催化CuAAC（炔烴標(biāo)記），也可無(wú)銅SPAAC（DBCO/BCN標(biāo)記）；

適配**活細(xì)胞/體內(nèi)（無(wú)銅）與體外高活性（銅催化）**等多場(chǎng)景應(yīng)用。

5. 強(qiáng)特異性+低非特異結(jié)合

疊氮僅與炔/DBCO/BCN反應(yīng)，不干擾氨基/羥基/巰基；

PEG鏈減少疏水相互作用，非特異吸附降低70%+，富集純度更高。

四、核心應(yīng)用場(chǎng)景

1. 低豐度蛋白/糖蛋白高靈敏度標(biāo)記（核心）

機(jī)制：先通過代謝標(biāo)記/化學(xué)修飾引入炔基（如炔基糖、炔基氨基酸），再用Biotin Azide Plus自催化點(diǎn)擊標(biāo)記；

應(yīng)用：低豐度膜蛋白、分泌蛋白、糖基化蛋白的特異性標(biāo)記，靈敏度達(dá)pg級(jí)，遠(yuǎn)超傳統(tǒng)生物素化方法。

2. 蛋白質(zhì)組學(xué)：靶向富集與鑒定

流程：標(biāo)記→鏈霉親和素磁珠富集→洗脫→酶解→質(zhì)譜鑒定；

優(yōu)勢(shì)：低豐度蛋白富集效率提升5–10倍，顯著提高質(zhì)譜檢出率，適配癌癥標(biāo)志物、信號(hào)通路蛋白、翻譯后修飾蛋白研究。