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基礎參數
【中文名稱】AZDye 430 琥珀酰亞胺酯 / AZDye 430 活性酯
【英文名稱】AZDye 430 NHS Ester / AZDye 430 SE / AZDye 430 Succinimidyl Ester
【分子式】C??H??N?O??S
【分子量】600.56
【產品純度】≥95% (HPLC)
【外觀性狀】橙黃色固體粉末
【儲存條件】-20℃避光干燥密封保存
【用途】生物大分子熒光標記、多色流式檢測、超分辨成像
【來源】西安強化生物科技
產品介紹

AZDye 430 NHS Ester是一款專為405/407 nm紫激光線設計的綠色熒光NHS酯標記試劑。其激發波長430 nm、發射波長539 nm,呈現明亮的綠色熒光,與AF430光譜高度一致,可直接替代使用。
該試劑以熒光團為核心,搭配NHS活性酯基團,在弱堿性條件下即可與生物分子中的伯胺高效偶聯——開瓶即用,無需額外活化。高水溶性確保標記后偶聯物在水相中穩定存在,不易聚集沉淀。
作用機理
NHS酯基團在pH 7.5–8.5條件下與蛋白質賴氨酸ε-氨基或N端α-氨基發生親核取代反應,生成穩定的酰胺鍵,同時釋放N-羥基琥珀酰亞胺。反應快速、專一,不需要催化劑,水相緩沖液中即可完成。
標記后的偶聯物在430 nm激發下發射539 nm綠色熒光,量子產率高,信號明亮。該染料pH 4–10范圍內熒光強度穩定,從酸性溶酶體到中性胞質,信號不衰減。
性能參數與競品對比
AZDye 430 NHS Ester的核心優勢可以用三個字概括:亮、溶、穩。
亮度:消光系數約15,000 cm?1M?1,量子產率約0.70,標記后信號強度顯著優于傳統AMCA和Coumarin 343,檢測靈敏度直接拉滿。
水溶性:高水溶性意味著可以使用更高的染料-蛋白比而不發生沉淀,獲得更均一、更明亮的偶聯產物。高摩爾比下不易發生顯著自猝滅,可標記更多染料分子,靈敏度更高。
光譜兼容性:激發430 nm / 發射539 nm,與DAPI/Hoechst(藍)、Cy3/AF594(紅)光譜分離度。斯托克斯位移約110 nm,有效降低樣本自發熒光背景,多色實驗中無需復雜補償。
與AF430相比,AZDye 430性價比更優;與DyLight 430相比,光穩定性更突出;與傳統染料相比,pH不敏感性和水溶性是最大的實用優勢。
應用領域
多色流式細胞術:配合405 nm激光器標記抗體,檢測細胞表面或胞內靶標,擴展同時檢測通道數。綠色通道與PE、APC幾乎無光譜重疊,補償矩陣簡潔。
超分辨顯微成像:光物理特性適配STORM等單分子定位技術,提供高解析度細胞結構圖像,是隨機光學重建顯微鏡的理想選擇。
免疫熒光與共聚焦成像:標記抗體后用于細胞內蛋白定位,pH 4-10信號穩定,從固定細胞到活細胞成像均可勝任。與DAPI、Cy3組合,三色共定位實驗干凈利落。
核酸標記:通過胺基修飾的寡核苷酸探針,實現熒光原位雜交(FISH),定位染色體或RNA分布。
Western Blot熒光檢測:標記一抗或二抗,替代傳統HRP顯色體系,實現多通道同時檢測,靈敏度與特異性兼顧。
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