基礎(chǔ)參數(shù)

【中文名稱】AFDye 555 琥珀酰亞胺酯、AFDye 555 活性酯

【英文名稱】AFDye 555 NHS Ester、AFDye 555 Succinimidyl Ester、AFDye 555 SE

【產(chǎn)品純度】≥95%

【外觀性狀】固體/粉末

【儲存條件】-20℃以下避光干燥保存，惰性氣體保護

【用途】試劑僅用于科研實驗

【來源】西安強化生物科技

產(chǎn)品介紹

AFDye 555 NHS Ester是一種高性能橙紅色熒光胺反應(yīng)性標(biāo)記試劑，由高性能熒光染料AFDye 555與N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS ester）活性基團共價連接而成，光譜特性等同于Alexa Fluor 555 NHS Ester。該試劑激發(fā)波長555 nm、發(fā)射波長565 nm，可使用488 nm或532 nm激光譜線激發(fā)，在pH 4-10范圍內(nèi)保持穩(wěn)定熒光輸出，不受酸堿環(huán)境干擾。其核心結(jié)構(gòu)中的四磺酸基團賦予分子的水溶性，有效避免蛋白疏水化聚集沉淀的風(fēng)險——這是相較于傳統(tǒng)Cy3和四甲基羅丹明的本質(zhì)優(yōu)勢。NHS酯形式使其可直接與蛋白質(zhì)、抗體、多肽等生物分子表面的伯胺基團偶聯(lián)，操作簡潔高效。

作用機理

NHS酯基團在pH 7.0-9.0的弱堿性條件下，與蛋白質(zhì)、多肽、抗體表面的伯胺基團（賴氨酸ε-氨基或N端α-氨基）發(fā)生親核取代反應(yīng)，釋放N-羥基琥珀酰亞胺，同時形成穩(wěn)定的酰胺鍵共價連接。該反應(yīng)選擇性高，不與巰基、羥基或羧基發(fā)生交叉反應(yīng)。對于免疫球蛋白IgG等大多數(shù)抗體，摩爾吸光系數(shù)約為203,000 cm?1M?1，推薦F/P值（染料/蛋白摩爾比）控制在4-9之間。標(biāo)記效率可通過公式計算：蛋白摩爾濃度 = (A280 ? A555 × 0.08) × 稀釋倍數(shù) / 203000；F/P = A555 × 稀釋倍數(shù) / (150000 × 蛋白摩爾濃度)。

性能參數(shù)與競品對比

AFDye 555 NHS Ester的摩爾消光系數(shù)高達150,000 cm?1M?1，A280/Amax僅為8%，意味著在280 nm處的背景吸收極低，標(biāo)記后蛋白定量更準(zhǔn)確。與Cy3相比：光穩(wěn)定性顯著更優(yōu)，在活細胞和固定細胞中連續(xù)照射后信號衰減幅度小得多；水溶性更強，四磺酸結(jié)構(gòu)確保染料不改變蛋白表面極性，大幅降低疏水化聚集沉淀風(fēng)險。與Alexa Fluor® 555相比：光譜一致，性價比更優(yōu)。與AF488搭配使用時，橙紅色與綠色熒光幾乎無光譜重疊，多色標(biāo)記中串色問題極小，是雙色乃至三色成像實驗的理想組合。

應(yīng)用領(lǐng)域

該試劑應(yīng)用方向成熟且覆蓋廣泛：其一，免疫熒光與細胞成像，標(biāo)記一抗或二抗用于組織切片觀察，橙紅色熒光在神經(jīng)組織或腫瘤切片中能清晰襯托目標(biāo)蛋白位置，與AF488組合可實現(xiàn)雙色共定位分析；其二，流式細胞術(shù)多色分析，作為第三或第四個顏色通道，與FITC、PE、APC等經(jīng)典染料光譜分離良好，補償矩陣簡潔；其三，F(xiàn)RET實驗，可與AF647、AF680等配對作為供體或受體染料，研究蛋白-蛋白相互作用；其四，氨基修飾寡核苷酸標(biāo)記，用于FISH、qPCR探針及分子信標(biāo)等核酸檢測技術(shù)。

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（本篇圖文信息由西安強化生物科技xw整理！本試劑僅限于科研實驗用途！）

供應(yīng)商：西安強化生物科技有限公司